Димеры это: Анализ крови на Д-димер в лаборатории KDL

Содержание

Анализ крови на Д-димер в лаборатории KDL

Д-димер – продукт распада фибрина, образуется в процессе лизиса тромба. Когда происходит повреждение кровеносного сосуда, то в организме запускается каскад свертывания крови, образуется фибриновый сгусток, который останавливает кровотечение. После того, как тромб выполнил свою функцию, то он должен разрушиться, чтобы восстановить проходимость сосуда.

Лизис тромба происходит под воздействием плазмина, фрагменты разрушения (деградации) фибрина можно определить в крови. Д-димер является одним из конечных продуктов разрушения фибрина. Уровень D-димера в крови может повышаться, когда в организме происходит тромбообразование и последующее разрушение тромботических масс, или идут процессы перестройки сосудистого русла, когда одни сосуды запустевают и тромбируются, а другие вновь образуются.

Нормальные значения Д-димера говорят о том, что наличие тромба маловероятно.

В каких случаях обычно назначают исследование Д-димера?

Исследование Д- димера используется при подозрении на тромботические состояния (например, тромбоз глубоких вен или тромбоэмболия легочной артерии), а также в диагностике такого тяжелого состояния, как синдром диссеминированного сосудистого свертывания.

Что именно определяется в процессе анализа?

Определяется количество Д-димера в плазме крови методом иммунохемилюминесцентного анализа.

Что означают результаты теста?

Нормальный (в пределах референсных значений) результат Д-димера говорит о том, что у человека, сдавшего этот анализ скорее всего нет острого состояния, связанного с повышенном образованием и распадом фибриновых тромбов. Этот показатель имеет отрицательное прогностическое значение: при нормальном Д-димере вероятность тромбоза низкая, при повышенном – требуется дополнительное обследование пациента.

Повышенный D-димер не всегда указывает на наличие тромбообразования, потому что ряд других факторов может привести к увеличению уровня D-димера в крови:

  • недавняя операция (ранний послеоперационный период)
  • травма
  • заболевания печени
  • беременность

D-димер имеет высокую чувствительность, но недостаточную специфичность, его следует использовать только для исключения тромбозов, а не для подтверждения диагноза.

Как увеличенные, так и нормальные уровни D-димера могут потребовать последующего наблюдения и могут привести к дальнейшему исследованию у больных с возможными признаками тромбоза. Люди с повышенными значениями D-димера и с умеренным и высоким риском тромбозов глубоких вен (по оценке лечащего врача) требуют дальнейшего изучения с помощью других инструментальных методов исследования.

Обычный срок выполнения теста

Обычно результат Д-димера можно получить в течение 1-2 дней.

Нужна ли специальная подготовка к анализу?

Кровь нужно сдавать утром натощак. Сообщить в лабораторию о всех принимаемых препаратах.

D-димер

D-димер – это белковый фрагмент, который образуется при растворении кровяного сгустка, возникающего при свертывании крови. Он является маркером тромбообразования, так как при этом процессе вместе с возникновением тромбов запускается и их растворение с образованием D-димеров.

Синонимы русские

Фрагмент расщепления фибрина.

Синонимы английские

D-dimer, Fragment D-dimer, Fibrin degradation fragment.

Метод исследования

Иммунотурбидиметрия.

Единицы измерения

Мкг FEU /мл (микрограмм фибриноген-эквивалентных единиц на миллилитр).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Исключить из рациона жирную пищу за 24 часа до исследования.
  • Исключить физическое и эмоциональное перенапряжение за 30 минут до исследования.
  • Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

D-димер – белковый фрагмент, который образуется в результате распада кровяного сгустка. При повреждении сосуда или ткани в организме запускается процесс свертывания крови – образования тромбов, в состав которых входит особый белок фибрин.

Он "скрепляет" между собой компоненты тромба и удерживает тромб там, где он образовался.

Тромбы могут возникать не только в месте повреждения тканей или сосудов, но и внутри сосудов при наличии предрасполагающих к этому факторов: повреждение внутренней выстилки сосудов различными эндогенными и экзогенными веществами и антителами, нарушение локальной гемодинамики – застой крови, наличие турбулентных потоков. Тромбы в сосудах встречаются при целом ряде заболеваний: варикозная болезнь вен нижних конечностей, мерцательная аритмия, осложненное течение инфекционных заболеваний, осложнения после проведенного хирургического вмешательства. Организм при тромбозе запускает механизмы, способствующие разрушению тромбов, в ходе их работы фибрин начинает разрушаться плазминогеном и образуются D-димеры. Таким образом, количество D-димеров в крови указывает на активность процессов разрушения тромбов и косвенно позволяет оценить активность тромбообразования. Наиболее часто данный тест используют для диагностики синдрома диссеминированного внутрисосудистого свертывания (ДВС), а также для мониторинга терапии тромбозов антикоагулянтами (например, гепарином).

Количество D-димеров может быть повышено при беременности, обычно оно постепенно нарастает к III триместру. До недавнего времени высокие показатели считались признаком угрозы развития тромботических осложнений при беременности, однако исследования последних лет показали, что четкой связи между уровнем D-димера и патологией беременности нет.

Анализ на D-димер в подавляющем большинстве случаев используется в качестве вспомогательного теста, и диагноз ставится с учетом клинической картины и результатов других исследований.

Для чего используется исследование?

  • Для диагностики ДВС-синдрома.
  • Для диагностики тромбоза глубоких вен.
  • Для дополнительной оценки выраженности тромбообразования и мониторинга проводимой антикоагулянтной терапии при тромбоэмболии легочных артерий, инсульте.

Когда назначается исследование?

  • При симптомах тромбоза глубоких вен:
    • выраженной боли в ногах (ноге),
    • выраженных отеках ног (ноги),
    • бледности кожи в зоне тромбоза.
  • При подозрении на тромбоэмболию сосудов легких:
    • внезапно возникшей одышке,
    • затруднении дыхания,
    • кашле,
    • кровохаркании (крови в мокроте),
    • резкой боли в грудной клетке,
    • учащении сердцебиения.
  • При ДВС, когда на фоне основного заболевания возникают следующие симптомы:
    • одышка,
    • синюшность кожных покровов,
    • кровоточивость десен,
    • тошнота, рвота,
    • сильные боли в мышцах и животе,
    • боль в области сердца,
    • сниженное мочеотделение.
  • При контроле за терапией антикоагулянтами.

Что означают результаты?

Референсные значения: 0 - 0,55 мкг FEU /мл.

Для беременных:

Неделя беременности

Референсные значения

До 13-й

0 - 0,55 мкг FEU /мл

13-21-я

0,2 - 1,4 мкг FEU /мл

21-29-я

0,3 - 1,7 мкг FEU /мл

29-35-я

0,3 - 3 мкг FEU /мл

Больше 35-й

0,4 - 3,1 мкг FEU /мл

Резкое повышение концентрации D-димера может указывать на большое количество тромбов в кровяном русле, что чаще всего обусловлено венозной тромбоэмболией или ДВС-синдромом.

При этом результаты исследования не позволяют установить локализацию тромбоза. Нормальный уровень D-димера означает, что, скорее всего, у пациента нет острой формы заболевания, вызывающего тромбообразование.

Умеренное повышение концентрации D-димера часто наблюдается при:

  • недавно перенесенных хирургических операциях,
  • травмах (не обширных),
  • сердечно-сосудистых заболеваниях,
  • онкологических заболеваниях,
  • заболеваниях печени,
  • нормально протекающей беременности, особенно на поздних сроках.
 Скачать пример результата

Важные замечания

Концентрация D-димера может быть повышенной у пожилых людей, а также у пациентов с высоким уровнем ревматоидного фактора при ревматоидном артрите.

Также рекомендуется

Кто назначает исследование?

Хирург, анестезиолог-реаниматолог, кардиолог, флеболог, терапевт, инфекционист.

D-димер (D-dimer) — диагностическое значение — Твой Доктор

D-димер является наиболее специфичным маркером деградации фибриновых сгустков любой локализации, проще говоря, маркером интенсивности и характера процессов тромбообразования. Увеличение концентрации D-димера четко и однозначно свидетельствует об активации фибринолиза, чему в свою очередь, обязательно предшествует избыточное образование нерастворимого фибрина, т.е. тромба.

Таким образом, поскольку процессы образования и распада фибрина жестко связаны, врач по интенсивности фибринолиза (фактически – по уровню D-димера в крови!) может оперативно и эффективно оценивать , как интенсивность, так и характер тромбообразования.

Повышение содержания D-димера в плазме крови свидетельствует об активации процессов свертывания крови в результате повреждения тканей или развития вызывающих тромботические осложнения заболеваний. Отрицательные результаты теста на D‑димер, напротив, позволяют с высокой вероятностью исключить возможность таких заболеваний или осложнений.

Диагностически значимые уровни D‑димера характерны не только при тромбозе глубоких вен (ТГВ), при тромбоэмболии легочной артерии (ТЭЛА), при диссеминированном внутрисосудистом свертывании (ДВС) крови, но и при различных травмах, при повышении вероятности развития инсульта и/или инфаркта, причем не только в пожилом, но и в молодом возрасте.

Физиологическое увеличение содержания D‑димера в крови наблюдается при нормальном прохождении беременности. При этом, повышение уровней D‑димера может достаточно рано (когда еще не поздно принять соответствующие меры) указывать на осложнения беременности и на опасность развития ДВС‑синдрома.

Определение D‑димера рекомендуется также при злокачественных новообразованиях, перед хирургическими вмешательствами и для ранней диагностики фибринолитических процессов (претромботический риск), в мониторинге тромболитической терапии.

Отрицательные (низкие) результаты теста на D‑димер так же имеют чрезвычайно высокую прогностическую значимость – нормальный уровень D‑димера даже на фоне соответствующей клинической картины позволяет исключить венозную тромбоэмболию и ДВС‑синдром.

 

Чувствительность анализа – 10 нг/мл.

Диапазон измеряемых концентраций: 0 – 1500 нг/мл.

Диапазон нормальных значений: 0 – 250 нг/мл.

 

D-димер, сдать анализ на Д-димер

Метод определения Иммуноанализ.

Исследуемый материал Плазма (цитрат)

Доступен выезд на дом

Онлайн-регистрация

Синонимы: Фрагмент расщепления фибрина. 

D-dimer, Fragment D-dimer, Fibrin degradation fragment. 

Краткая характеристика определяемого вещества D-димер

D-димер – маркёр тромбообразования и фибринолиза.

Несмотря на ограниченную специфичность теста, определение D-димера имеет преимущества по сравнению с измерением других маркёров коагуляции и фибринолиза, так как D-димер образуется только при условии, что имеют место оба эти процесса. Так, уровень D-димера не меняется при первичном фибринолизе, дисфибриногенемиях.


С какой целью определяют уровень D-димера в крови

В процессе исследования проводят определение уровня D-димера – основного маркера тромбообразования и фибринолиза. В большинстве случаев анализ применяется как дополнение к другим гематологическим тестам.

Что может повлиять на результат теста «D-димер» и дополнительные варианты применения

Повышенный уровень D-димера обнаруживается при многочисленных состояниях, связанных с активацией коагуляции (синдром диссеминированного внутрисосудистого свёртывания крови, тромбоз глубоких вен, лёгочная тромбоэмболия, массивные повреждения тканей или хирургические операции, сердечная недостаточность, инфекции, воспаления, неопластические состояния).  

На концентрацию D-димера в крови влияют такие факторы как величина тромба, время от начала клинических проявлений до назначения антикоагулянтной терапии, приём антикоагулянтов, на фоне которых уровень D-димера постепенно снижается, тромболитическая терапия, которая вызывает повышение уровня D-димера. 

У беременных женщин, начиная с ранних сроков беременности, уровень D-димера в крови постепенно повышается. К концу срока беременности значения его могут быть в 3-4 раза выше исходного уровня. Значительно более высокие показатели D-димера отмечаются у женщин с осложнённым течением беременности (с гестозом, преэклампсией), а также у беременных, больных диабетом, заболеваниями почек. 

Концентрация Д-димера выше у лиц старшей возрастной группы. 

Пределы определения: 21-197 000 нг/мл.

Литература

  1. Клинические рекомендации (протоколы лечения). Профилактика тромбоэмболических синдромов. ГОСТ Р 56377-2015.  
  2. Соловьева И. В. Д-димер: клиническое значение для пожилых пациентов. Лабораторная служба. 2017;1:14-22.  
  3. 2019 ESC Guidelines for the diagnosis and management of acute pulmonary embolism developed in collaboration with the European Respiratory Society (ERS). European Heart Journal. 2020;41:543-603.  
  4. Cini M. et al. D-dimer use for deep venous thrombosis exclusion in elderly patients: a comparative analysis of three different approaches to establish cut-off values for an assay with results expressed in D-dimer units. Int. Jnl. Lab. Hem. 2014;36:541-547.  
  5. Kovac M. et al. The use of D-dimer with new cutoff can be useful in diagnosis of venous thromboembolism in pregnancy. European Journal of Obstetrics & Gynecology and Reproductive Biology. 2010;148:27-30.

МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОГО ИССЛЕДОВАНИЯ D-ДИМЕРА - Пресс-служба КазНМУ. Казахский национальный медицинский университет

27 Sep 2013

УДК 616. 14-005.6-615.225.4:617.3

Л.Б. Шайкенова

ассистент кафедры лабораторной диагностики

и молекулярной медицины КазНМУ им Асфендиярова С.Ж., Алматы

Dдимер – продукт деградации фибрина. Который используется в клинике как маркер тромбозов. В статье представлены основные методы которыми проводятся лабораторные исследования D-димера.

Ключевые слова:D-димер, микролатексная агглютинация, ИФА с использованием моноклональных антител, иммунохроматография

D -димер – белковый продукт распада фибринового сгустка. Под действием плазмина расщепляется как фибрин, так и фибриноген, но D-димер образуется только при ферментативном расщеплении фибрина, являясь наиболее специфичным маркером деградации фибриновых сгустков.

 

 

 

В клинической практике D-димер может быть использован как маркер способности организма к гиперкоагуляции и эндогенного фибринолиза, повышенные уровни которых характерны для тромбозов. Так, данный положительный тест имеет негативное прогностическое значение для больных с глубоким тромбозом вен нижних конечностей и тромбоэмболии легочной артерии. У амбулаторных больных данный тест является дополнительным средством, включенным в большинство алгоритмов обследования для исключения диагноза глубоких тромбозов вен. Целесообразно назначать определение D-димера и во время беременности, при которой плазменный уровень D-димера постепенно возрастает и обладает слабым прогностическим моментом для исключения диагноза тромбоза глубоких вен после 20 недель беременности. В период родов уровень D-димера обычно сильно возрастает, а затем быстро снижается на 3-й день после родов, и возвращается к нормальным значениям постепенно примерно через 4 недели. D-димер является чувствительным маркером для определения синдрома диссеминированного внутрисосудистого свёртывания (ДВС-синдром), а также для оценки потенциального риска у больных с имеющимся ДВС-синдромом и для мониторинга в динамике начатой терапии. Установлено, что D-димер является независимым фактором риска сердечно-сосудистой смертности, а также вместе с другими тромботическими факторами может играть роль потенциальных факторов риска развития ишемической болезни сердца (ИБС).

В норме содержание Д-димера в плазме не должно превышать 250 нг/мл. Нормальный уровень D-димера с очень высокой степенью достоверности говорит об отсутствии тромбоза и риска его развития, так с достоверностью 92% можно говорить об отсутствии ТГВ, если уровень D-димера в норме. К группе риска относятся пациенты со значением D-димера от 400 до 600 нг/мл, а концентрация выше 600 нг/мл говорит о наличии патологии.

Для лабораторной диагностики уровня D-димера в настоящее время используется три метода: микролатексной агглютинации, ИФА и иммунохроматографии.

Широкое распространение получила технология микролатексной агглютинации с фотометрической регистрацией реакции (иммунотурбидиметрия). Суть метода заключается в том, что при добавлении плазмы пациента, содержащей Д-димер, к реагенту происходит увеличение оптической плотности реагента, представляющего собой взвесь микролатексных частиц, покрытых антителами против Д-димера. При этом измеряемое увеличение оптической плотности пропорционально концентрации Д-димера в исследуемом образце.

Иммунотурбидиметрический метод легко автоматизируется, данная технология реализована у части автоматических биохимических анализаторов. Однако следует помнить, что в структуре организации клинико-диагностической лаборатории отдел биохимических исследований, даже оснащенный соответствующим образом, занимается в первую очередь оценкой биохимических показателей. Как правило, поток исследований и список выполняемых тестов в подразделении биохимии КДЛ достаточно объемны. Определение концентрации Д-димера обычно проводится в комплексе с другими показателями системы гемостаза и, несомненно, его удобнее выполнять на коагулометрах. Для этих целей требуются коагулометры с оптическим способом регистрации. Именно такие модели приборов имеют специальную схему измерения оптической плотности, пригодную для проведения оценки проб с микролатексагглютинацией. Кроме того, с помощью программного обеспечения оптического коагулометра проводятся построение необходимого калибровочного графика, расчет результата и, что немаловажно, внутрилабораторный контроль качества исследований. Правильный выбор коагулометра с надежной оптической схемой позволит выполнять оценку концентрации Д-димера с высокой точностью, методически просто и быстро.

При выборе реагентов для определения концентрации Д-димера необходимо учитывать стабильность латекс-реагента после вскрытия, наличие калибровочного и контрольного материалов, удобство в использовании, специфичность и чувствительность теста, пределы линейности измерений.Недостатком метода является его низкая чувствительность.

Наиболее чувствительный метод ИФА (порог чувствительности: ниже 60 нг/мл) проводится с использованием моноклональных антител и используется в клинике для исключения тромбоза и для мониторинга антитромботической терапии. Для определения Д-димеров разработаны антитела к неоантигенным эпитопам на них. Это моноклональные антитела ДД-3В6, DD5, MA8D3, MAb 8-8G, 54H9 к эпитопам гамма-связей в Д-доменах молекул фибрина.

Указанные антитела связываются с Д-димерами, содержащими Д-Д-ковалентные связи, но не вступают в реакцию с фибриногеном и растворимыми фибрин-мономерами. Определение Д-димера при помощи таких антител показывает, что в процессе фибринолиза расщепляется именно фибрин, а не фибриноген и фибрин-мономеры. На определение Д-димера практически не оказывают влияния техника взятия крови, наличие примеси тромбоцитов, не требуется использование ингибиторов для подавления других факторов.Концентрация Д-димера пропорциональна активности фибринолиза и количеству лизируемого фибрина. Этот тест позволяет судить об интенсивности процессов образования и разрушения фибриновых сгустков. Д-димеры достаточно долго циркулируют в крови; время их полувыведения составляет более 24 ч. Повышенная концентрация Д-димера может сохраняться в течение нескольких недель после острого тромбоза.

Применение иммуноферментного анализа (ИФА) для измерения концентрации Д-димера показало высокую стоимость единичных исследований, учитывая существенные затраты на специальное оборудование. Кроме того, ИФА достаточно длителен по времени и обычно проводится не индивидуально, а на серии образцов.

Иммунохроматографическая экспресс-диагностика (ИХЭД) – новый высокотехнологичный метод, позволяющий вне лабораторных условий и в течение 5-20 минут не только точно диагностировать большой спектр самых серьезных патологий (инфаркт миокарда, опасные инфекции, воспалительные процессы, онкозаболевания, гормональные нарушения и др.), но и оценивать степень их тяжести. Широкое применение ИХЭД позволяет обнаруживать заболевания на ранней стадии и предотвращать их развитие. Экспресс-метод иммунохроматографии для определения уровня D-димера сочетает скорость проведения анализа (от 2 минут) с высокой чувствительностью (пороговое значение: от 60 нг/мл). В настоящее время отмечена особая диагностическая ценность иммунохроматографического метода (например, NycoCard D-dimer) при тромбозе глубоких вен. Оперативность проведе­ния анализа требуется при тяжелых тромботических осложнениях, когда концентрация Д-димера может значительно изменяться в течение одного часа. От точности и своевременности результатов анализа зависят меры предупреж­дения тромбоэмболии и инфаркта.

Список литературы

1. Гильманов А.Ж. Д-димер: что? Как? У кого? С какой целью? // Клинико-лабораторный консилиум. 2009. № 6 (31). С. 38-46.

2. Клиническая лабораторная аналитика / Под ред. Меньшикова В.В. М.: Лабпресс, 2000. С. 157.

3. Момот А.П. Патология гемостаза. СПб.: ФормаТ, 2006. С. 51-53.

4.
В.А. Герасименко,Н.А. Оганесян, Справочник заведующего клинико-диагностической лабораторией. Оценка концентрации Д-димера в клинико-лабораторной практике 2011. – С.75-77.

Түйін: D -димер – фибриннің деградациясының өнімі. Ол тромбоздардың маркері ретінде қолданылады. Мақалада D-димерді зертханалық зерттеудің негізгі жолдары көрсетілген.

Resume: D -dimer – product from degradation of fibrin. Which is used in medicine as marker of thrombosis. In article представлены are introduced general laborotorical methods which are used to do researches about D –dimer.

 

МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОГО ИССЛЕДОВАНИЯ D-ДИМЕРА

Анализ крови на Д-димер при беременности

D-димер — продукт распада фибрина, образуется при фибринолизе. Повышенные уровни обнаруживаются при гиперкоагуляции, и помогают оценить интенсивность образования и разрушения фибриновых сгустков. Данное исследование имеет значение при оценки риска тромбозов глубоких вен и легочной тромбоэмболии. У беременных женщин наблюдается физиологическое повышение данного показателя.
При повреждении ткани или сосуда активируется процесс тромбообразования, который защищает организм от значительной кровопотери. В состав кровяных сгустков входит фибрин. Это вещество обеспечивает стабильность сгустка, его закрепление на месте образования. Тромб перекрывает место повреждения, он сначала замедляет кровотечение, а затем полностью его останавливает. После заживления тромб естественным образом растворяется. В ходе этого процесса и образуются D-димеры.

В некоторых случаях тромбы образуются не в месте повреждений, где они жизненно необходимы, а в сосудах. Это происходит, если имеются предрасполагающие к этому факторы. К ним относится застой крови, повреждения внутреннего выстилающего слоя сосудов, застой крови и прочее. Появление тромбов внутри сосудов характерно для многих заболеваний (например, для мерцательной аритмии, варикоза). Также они могут образоваться при развитии осложнений после оперативного вмешательства, серьезных инфекционных заболеваний.

При тромбозе организм старается избавиться от ненужных сгустков крови. С этой целью он активирует механизм растворения тромбов. При этом разрушается фибрин, количество D-димеров в крови увеличивается. Их концентрация позволяет оценить, насколько активно в организме образуются тромбы. Чаще всего данный анализ назначается в комплексе с другими тестами в ходе диагностирования ДВС-синдрома. Также он используется для наблюдения состояния пациентов с тромбозами, которые получают антикоагулянтную терапию.

У беременных концентрация D-димеров этих фрагментов белка часто повышается. Как правило, показатели увеличиваются постепенно к третьему триместру. Ранее врачи расценивали рост показателей, как повышение риска тромботических осложнений. Проведенные недавно исследования доказали, что такая связь отсутствует. Сегодня умеренное повышение показателей оценивается, как естественный процесс. Несмотря на это, беременные с повышенным уровнем фрагментов расщепления фибрина должны находиться под постоянным врачебным контролем.

Данный тест анализ на D-димер, как правило, назначается в комплексе с другими исследованиями. Только на его основании диагноз не ставится, в обязательном порядке учитываются данные других тестов и клиническую картину. Резкое увеличение показателей свидетельствует о большом количестве тромбов. Установить точную причину их образования и локализацию по результатам данного теста невозможно. Умеренное повышение уровня фрагментов белка может объясняться недавней травмой, беременностью, пожилым возрастом. Также это наблюдается после операций, у пациентов со злокачественными новообразованиями, патологиями сердца, печени, сосудов.

Д-димер - Клиника Екатерининская

Коронавирус COVID-19 (SARs-CoV-2) определение РНК (кач.) - 2000 ₽

КТ органов грудной клетки - 3400 ₽

Определение антител класса IgG, IgM к вирусу SARs-CoV-2 в сыворотке крови (Комплекс) - 1900 ₽

Определение суммарных антител класса (IgG, IgM, IgA) к вирусу SARs-CoV-2 в сыворотке крови (США) - 2500 ₽

Определение антител класса IgM к вирусу SARs-CoV-2 - 1000 ₽

Определение антител класса IgА (S домен) к вирусу SARS-CoV-2 - 1700 ₽

Определения антител класса Ig G к коронавирусу SARS-CoV-2 к S белку (включая область RBD) для выявления защитного иммунитета после перенесенного Сovid-19 или поствакцинального иммунитета - 1700 ₽

Экспресс-тест на выявление COVID-19 в клинике - 2400 ₽

Определение антител класса IgA, IgG, IgM к вирусу SARs-CoV-2 в сыворотке крови (Комплекс ) - 3500 ₽

Коронавирус COVID-19 (SARs-CoV-2) определение РНК (кач. ) и Определение суммарных антител класса (IgG, IgM, IgA) к вирусу SARS-CoV-2 в сыворотке крови (США) - 4500 ₽

Ингибирование димеров RAF: для танго нужны двое | Сделки биохимического общества

В настоящее время исследуются две различные стратегии ингибирования передачи сигналов мутантного RAF, одновременно уменьшающие парадоксальную активацию - пан-ингибиторы RAF типа II и разрушители парадокса. RAFi типа II нацелены на конформации RAF-белков DFG-out и αC-helix-in (рис. 4). Это важно, поскольку они способны воздействовать как на активные димеры RAF, так и на активные мономеры RAF с аналогичной эффективностью и, следовательно, ингибировать передачу сигналов ERK в клетках с активными мономерами или димерами RAF.Блокируя белок RAF в конформации αC-спирали, эти препараты сильно индуцируют димеризацию белка RAF; однако, поскольку BRAF и CRAF нацелены на схожую активность, трансактивация димерного партнера снижается. Примеры ингибиторов RAF типа II включают AZ628, белварафениб, CCT196969, CCT241161, LY3009120 и TAK-580 (MLN2480). Хотя эти препараты были эффективны in vitro, [99,100], их применение in vivo было более ограниченным [101] из-за отсутствия селективности в отношении мутантного BRAF, что контрастирует с ингибиторами первого поколения, такими как вемурафениб и дабрафениб. .Это может потенциально привести к большей токсичности в нераковых клетках и большему нарушению передачи сигналов RAF дикого типа, хотя пример сорафениба показывает, что некоторые ингибиторы пан-RAF могут хорошо переноситься [102,103]. Эти препараты вызывают частичный ответ при меланоме с мутантным NRAS и при некоторых формах рака с мутантным BRAF [100]. RAFi типа II потенциально может стать частью стандартного лечения как способ ограничить передачу сигналов ERK1 / 2, возникающую в результате как мутантных белков RAF, так и управляемых RAS, белков RAF дикого типа, поскольку они являются пан-RAF-специфичными и поэтому не вызывают парадоксальной активации. .Они могут устранить некоторые общие механизмы приобретенной устойчивости к селективным ингибиторам BRAF V600E / K ; например, ингибиторы типа II должны смягчать переход с BRAF V600E на ARAF или CRAF, который наблюдается при меланоме. Однако необходимо показать, что лекарственные средства способны работать в пределах окна, которое вредно для раковых клеток, но не оказывает сильного влияния на передачу сигналов ERK1 / 2 дикого типа. Исследования, в которых эти препараты используются как часть совместного лечения с ингибиторами MEK, продолжаются, чтобы увидеть, улучшит ли это скорость ответа у пациентов.

Paradox breakers - это класс ингибиторов BRAF, недавно разработанный Plexxikon [104]. Соединения были разработаны с использованием структуры вемурафениба для избирательного связывания BRAF и различных концевых сульфонамидных и сульфамидных модификаций. Кандидаты были проверены в клетках на ингибирование ERK1 / 2 в клетках BRAF V600E без запуска парадоксальной активации ERK1 / 2 в линиях мутантных клеток RAS. PLX7904 был идентифицирован на этих экранах, и вскоре после этого была разработана более оптимизированная структура PLX8394.Эти препараты прочно связываются с Leu505, непосредственно прилегающим к мотиву RKTR αC-спирали. Это разрушает интерфейс димера RAF, предотвращая индукцию гетеродимеров BRAF: CRAF, обычно наблюдаемых в мутантных по RAS клетках, обработанных ингибиторами RAF, без снижения аффинности связывания лекарственного средства с партнером димера. В одном исследовании клеточные линии были получены от пациента с одновременной мутантной меланомой BRAF V600E и мутантным KRAS колоректальным раком, при этом парадоксальные нарушители подавляли мутантные клетки BRAF V600E без парадоксального усиления роста мутантных клеток KRAS. [105].Прерыватели парадокса более специфичны для мутантов BRAF, в частности мутантов BRAF V600, чем белки WT-RAF. Это означает, что они не подходят для лечения рака с мутантами по RAS, однако они потенциально могут стать в будущем заменой RAFi типа I½ для лечения мутантных форм рака BRAF, таких как большинство меланом и волосатоклеточных лейкозов, без парадоксального индуцирования образования опухолей. Кроме того, эффективность этих средств устранения парадокса сохранялась при раке с димеризацией-опосредованной устойчивостью к вемурафенибу [104], что позволяет предположить, что средства устранения парадокса могут быть использованы после развития устойчивости к RAFi типа I½.

PLX8394 также показал некоторую эффективность против слитых белков BRAF [106]. Слияния BRAF содержат каталитически активный домен киназы CR3, но лишены регуляторных доменов CR1 и CR2 [107]. В некоторых линиях клеток меланомы, управляемых слиянием BRAF с 5'-партнером, который содержит домен димеризации, PLX8394, как было показано, парадоксальным образом активирует передачу сигналов RAF [108]. Одной из возможных причин недостаточной эффективности PLX8394 при некоторых злокачественных опухолях слияния BRAF может быть то, что каждый гомодимер BRAF: BRAF содержит конститутивно праймированную область NtA, что означает, что, даже если один партнер может быть ингибирован PLX8394, трансактивация димерного партнера все еще может быть возможно, если это взаимодействие стабилизируется димеризацией 5'-партнера по слиянию. Слияния BRAF потенциально могут управлять приобретенной устойчивостью к PLX8394, отмеченной в некоторых доклинических испытаниях, в дополнение к повышенной экспрессии RTK и активности mTOR, потенциально компенсирующей снижение p-ERK1 / 2 [109]. Нарушители парадокса в настоящее время проходят стадию испытаний I / IIa (NCT02428712).

Тест на D-димер для сгустков крови: нормальный диапазон, повышенные результаты

Тест на D-димер - это анализ крови, который можно использовать для исключения наличия серьезного сгустка крови.

Когда вы получаете порез, ваше тело делает несколько шагов, чтобы у вас образовался сгусток крови. Это нормальная часть исцеления - без него у вас продолжалось бы кровотечение, и у вас возникла бы гораздо более серьезная проблема.

Когда кровотечение остановится, сгусток больше не понадобится. Итак, ваше тело делает серию шагов в другом направлении и разрушает сгусток.

В конце концов, в вашей крови плавают остатки веществ - например, после строительного проекта у вас есть древесная пыль.

Один из этих остатков называется D-димером. Это часть белка. Обычно со временем это проходит. Но вы можете получить высокий уровень D-димера в крови, если у вас большой сгусток, например, при тромбозе глубоких вен (ТГВ).

Продолжение

При ТГВ у вас есть сгусток глубоко в одной из ваших вен, обычно в ногах, и это может привести к серьезным проблемам.

Ваш врач может использовать этот тест, который проверяет уровень D-димера в вашей крови, чтобы выяснить, есть ли у вас тромб.Вы также можете услышать этот тест под названием:

  • Тест на фрагмент D-димера
  • Тест на фрагмент деградации фибрина

Когда мне нужен этот тест?

Некоторые тесты помогают вам точно узнать, что симптомы вызывают определенное заболевание или состояние. Другие тесты более полезны, чтобы исключить определенное состояние как причину. Тест на D-димер можно использовать в обоих направлениях, в зависимости от того, что ищет ваш врач.

Чтобы исключить ТГВ и другие состояния: Тест на D-димер наиболее полезен, когда ваш врач считает, что что-то еще вызывает ваши симптомы, и хочет быстро исключить эти причины:

Продолжение

В этом случае тест полезен только в том случае, если вероятность образования тромбов невысока. Положительный результат теста на D-димер не означает, что у вас есть тромб. Чтобы это проверить, потребуются другие тесты. Если у вас больше шансов получить тромб, вам понадобятся другие тесты. У вас есть более высокие шансы на образование сгустка с:

Для проверки на диссеминированное внутрисосудистое свертывание: D-димер также можно использовать для помощи в проверке так называемого диссеминированного внутрисосудистого свертывания (ДВС), при котором тромбы образуются в мелких кровеносных сосудах повсюду. ваше тело, а также вызывает кровотечение.Это может быть опасно для жизни.

Он также используется для проверки лечения ДВС-синдрома. Если уровень D-димера падает, это признак того, что лечение работает.

Что происходит во время теста?

Вам не нужно делать ничего особенного, чтобы подготовиться к тесту на D-димер. Ваш врач использует тонкую иглу для взятия небольшого количества крови. Вы почувствуете пощипывание или покалывание, когда введете иглу. У вас может появиться болезненность или синяк в месте забора крови, но обычно это все.

Обычно результаты получаются быстро.Этот тест часто используется в отделениях неотложной помощи.

Что означают результаты?

В разных лабораториях тесты могут проводиться по-разному, поэтому имейте в виду, что нормальные результаты могут отличаться. Ваш врач может помочь вам более четко понять, что означают ваши результаты.

Если ваш результат «отрицательный», скорее всего, у вас нет проблем со сгустками крови, такими как ТГВ.

Если ваш результат «высокий», это означает, что вам потребуется дополнительное тестирование, чтобы определить, есть ли у вас тромб. Этот тест не может подтвердить, что у вас DVT или PE.Это может только помочь исключить их.

Высокий результат можно получить и по причинам, не связанным со сгустком, например:

  • Инфекция
  • Заболевание печени
  • Некоторые виды рака

Димер - обзор | Темы ScienceDirect

19

Эти димеры как класс поглощают в ультрафиолете. Все показывают максимум в диапазоне от 2350 до 2850 A. у некоторых есть второй максимум в диапазоне от 3000 до 3750 А. Поэтому для фотодиссоциации димеров на окрашенные триарилимидазолильные радикалы предпочтительно использовать свет с такими длинами волн.Фотолиз можно проводить путем облучения твердого димера или предпочтительно раствора в подходящей среде, которая должна быть по существу инертной по отношению к димеру, имидазолильным радикалам и фотолизирующему излучению. Подходящие растворители включают нитрилы, такие как ацетонитрил, углеводороды, такие как бензол и толуол, сульфоксиды и сульфоны, такие как диэтилсульфоксид и сульфолан, сложные эфиры и полиэфиры, такие как этилацетат и поли (метилметакрилат), сложные эфиры и ацетали, такие как тетрагидрофуран, полиэтиленгликоль и поли винилбутираль и (менее предпочтительно спирты или другие подобные вещества, содержащие потенциально удаляемые водороды, такие как этанол, 2-пропанол и бутанол.

В условиях фотолиза, способствующих диссоциации димера, равновесие по уравнению 1 смещается вправо и появляется цвет. Когда световой раздражитель удаляется, радикалы рекомбинируют, и цвет тускнеет. Обычно в отсутствие света положение равновесия настолько лево, что характерный радикальный цвет не виден. (Иногда, однако, сами димеры будут иметь некоторую окраску, связанную с присутствием несоединенных радикалов.)

Состав димера или димеров в фотохромных композициях зависит от таких преобладающих условий, как растворитель, концентрация димера и температура.Например, в солнцезащитном экране, содержащем фотохромную систему по настоящему изобретению, один или несколько димеров, находящихся в равновесии с соответствующими радикалами, как определено, могут преобладать при летних или тропических температурах, в то время как другие изомерные димеры (отличаются только тем, как соединяются имидазольные кольца, как обсуждается выше) может быть предпочтительным при зимних или арктических температурах. Однако разновидности триарилимидазолила, ответственные за характерный цвет фототропной системы при активации света и скорость его исчезновения в темноте, будут одинаковыми во всех условиях.

Конечно, смеси фотохромных димеров, которые могут отличаться не только по способу соединения имидазольных колец в них, но также и по способу замещения фенильных групп имидазольных колец, также могут быть использованы при составлении фотохромных систем и устройств по настоящему изобретению. .

Поскольку структуры новых триарилимидазолильных радикалов и, следовательно, их свойства, такие как цвет и скорость рекомбинации (выцветания), не зависят от того, как имидазольные кольца соединены в различных их возможных соответствующих димерах, димеры должны быть только фотолитически диссоциируемый до соответствующих триарилимидазолильных радикалов для целей данного изобретения.

Биимидазолы обычно представляют собой твердые вещества, и их можно охарактеризовать элементным анализом, молекулярной массой, точкой плавления, цветом; инфракрасные, видимые и ультрафиолетовые спектры адсорбции; фототропизм, термотропизм и пьезотропизм (реакция на изменение давления), когда такие свойства существуют для конкретного соединения. Инфракрасная спектроскопия, среди других физических методов, может быть использована для определения того, как имидазольные кольца соединяются в димере, если это желательно, из-за различий в абсорбции между углерод-углеродными, углерод-азотными и азот-азотными связями.Рентгеноструктурный анализ также полезен для определения кристаллической формы и молекулярной конфигурации биимидазола. Различные биимидазолы, включая димерные изомеры, могут различаться по своим фототропным и термотропным свойствам, то есть по тому, насколько легко они диссоциируют под действием света и тепла. Кроме того, как обсуждалось ранее, стандартные методики получения обычно дают димеры, которые термически стабильны при обычных температурах. Биимидазолы также могут быть охарактеризованы свойствами соответствующих имидазолильных радикалов, такими как цвет, спектры поглощения и скорость рекомбинации, т.е.е., жизнь цвета, время вернуться к естественному состоянию после отключения источника излучения.

PDB-101: Молекула месяца: димеры тимина

Молекула месяца

По категориям По дате По названию

Ультрафиолетовый свет повреждает нашу ДНК, но наши клетки способы исправить ущерб

Лето пришло, и мы все идем на улицу, чтобы насладиться солнцем. Но не забудьте взять солнцезащитный крем, так как слишком много солнечного света может повредить ваши клетки.Небольшие дозы солнечного света необходимы для создания витамина D, но большие дозы атакуют вашу ДНК. Ультрафиолет - главный виновник. Наиболее энергичные и опасные длины волн УФ-света, называемые УФС, экранируются (по крайней мере, на данный момент) озоном в верхних слоях атмосферы. Однако более слабый УФ-свет, называемый УФА и УФВ, проходит через атмосферу и достаточно силен, чтобы вызывать химические изменения в ДНК.
Опасные димеры
Ультрафиолетовый свет поглощается двойной связью в основаниях тимина и цитозина в ДНК.Эта добавленная энергия раскрывает связь и позволяет ей реагировать с соседним основанием. Если соседом является другое основание тимина или цитозина, оно может образовывать ковалентную связь между двумя основаниями. Здесь показана наиболее распространенная реакция: два основания тимина образовали плотный димер тимина с двумя связями, склеивающими основания вместе. Верхнее изображение взято из записи PDB 1n4e , а изображение крупным планом внизу - из записи PDB 1ttd . Это не редкость: каждую секунду пребывания на солнце в каждой клетке кожи образуется от 50 до 100 таких димеров!
Проблемы с полимеразами
Эти димеры неуклюжие и образуют жесткий излом в ДНК.Это вызывает проблемы, когда клетке необходимо воспроизвести свою ДНК. У ДНК-полимеразы проблемы с чтением димера, поскольку он не входит в активный центр. Димеры TT, подобные показанным здесь, не представляют серьезной проблемы, поскольку они обычно правильно спариваются с аденином при репликации ДНК. Но с димерами СС дело обстоит не так. ДНК-полимераза часто неправильно связывает с ними аденин вместо гуанина, вызывая мутацию. Если это происходит в важном гене, который контролирует рост клеток, таком как гены тирозинкиназы Src или супрессора опухоли p53, мутация может привести к раку.
Контроль ошибок
Мы проводим много времени на солнце, поэтому неудивительно, что у нас есть мощный механизм для решения этих проблем. Наши клетки используют процесс, называемый эксцизионной репарацией нуклеотидов, который требует согласованных усилий большого набора белков, которые распознают поврежденные основания, вырезают участок ДНК с ошибкой и затем создают новую копию поврежденного участка. У других организмов есть дополнительные механизмы коррекции. Например, фермент слева (запись PDB 1vas ) представляет собой эндонуклеазу, которая отсекает поврежденные основания, делая сайт доступным для восстановления.Удивительно, но эта эндонуклеаза не распознает димер тимина напрямую. Вы можете видеть на этом рисунке, что димер тимина (окрашенный в пурпурный цвет) вообще не касается фермента. Вместо этого фермент распознает один из аденинов, связанный с димером. Поскольку пара оснований ослаблена из-за искривленной формы димера, аденин легко выкидывается и связывается с карманом фермента. Фермент справа (запись PDB 1tez ) представляет собой фотолиазу, которая непосредственно разрывает связи, соединяющие димер, исправляя ошибку на месте. Как ни странно, фотолиазы используют видимый свет для ускорения этого процесса. Эта структура захватывает ДНК после фиксации димера тимина. Обратите внимание, что два основания тимина (окрашены в пурпурный цвет) выворачиваются из нормальной спирали ДНК и связаны в кармане на поверхности фермента.
Изучение структуры
Большинство ДНК-полимераз с трудом реплицируют ДНК с димерами пиримидина. Фермент слева, из записи PDB 1rys , является исключением: он предназначен для чтения через поврежденную ДНК.У него свободный активный сайт, поэтому он может легко вмещать жесткий димер тимина. Однако этот открытый активный центр делает фермент довольно склонным к ошибкам. Более типичная ДНК-полимераза показана справа, из записи PDB 1sl2 . Он плотно охватывает ДНК и благодаря этому тесному контакту очень точно копирует ДНК. Однако у него много проблем с поврежденными основаниями, и он работает в 3000 раз медленнее с димерами тимина, чем с нормальной ДНК.

Это изображение было создано с помощью RasMol. Вы можете создать похожие изображения, щелкнув здесь коды доступа и выбрав один из вариантов для просмотра в 3D.


Связанные ресурсы PDB-101
Ссылки
  1. Х. С. Блэк, Ф. Р. де Грюйл, П. Д. Форбс, Дж. Э. Кливер, Х. Н. Анантасвами, Э. К. де Фабо, С. Э. Ульрих и Р. М. Тиррелл (1997) Фотоканцерогенез: обзор. Журнал фотохимии и фотобиологии B: Биология 40, 29-47.
  2. Т. Линдал и Р. Д. Вуд (1999) Контроль качества путем репарации ДНК.Science 286, 1897–1905.

июль 2007, Дэвид Гудселл

doi: 10.2210 / rcsb_pdb / mom_2007_7

О молекуле месяца

Молекула месяца RCSB PDB Дэвид С. Гудселл (Исследовательский институт Скриппса и RCSB PDB) представляет краткие отчеты на выбранные молекулы из банка данных по белкам. Каждый выпуск включает введение в структуру и функцию молекулы, обсуждение значимости молекулы для здоровья и благополучия человека, а также предложения о том, как посетители могут просматривать эти структуры и получать доступ к более подробной информации. Подробнее

Пока еще так близко: димеры α-катенина помогают мигрирующим клеткам собираться вместе | Журнал клеточной биологии

Эпителиальные клетки в тканях используют свои актиновые цитоскелеты для слипания, в то время как незакрепленные клетки заставляют мигрировать активные выступы плазматической мембраны. В этом выпуске Wood et al. (2017. J. Cell Biol. https://doi.org/10.1083/jcb.201612006) показывают, что компонент соединения α-катенин имеет решающее значение для свободно движущихся клеток, способствуя адгезии и миграции.

Актин-связывающие белки регулируют сборку, организацию и сократительную способность актиновых филаментов. Определенные наборы актин-связывающих белков обнаруживаются в межклеточных адгезиях или прикреплениях клетка-внеклеточный матрикс, с уникальными функциями в организации актина для создания каркаса, генерации силы или сигнала. Однако, когда клетки меняются между свободным движением и привязанными в поляризованном эпителии, им необходимо перепрофилировать свои актиновые цитоскелеты. Таким образом, многие актин-связывающие белки изменяют местоположение и функцию.По правде говоря, большинство актин-связывающих белков выполняют несколько функций, которые могут быть в нерастворимом цитоскелете, цитоплазме или ядре. Это помогает клетке координировать сигналы окружающей среды с действиями или функциями каждого белка. Это также поднимает интересные вопросы о механизмах, с помощью которых клетки регулируют одни и те же белки в разных местах для выполнения специализированных действий, в зависимости от контекста.

Связывающий и связывающий F-актин белок α-катенин является ярким примером многофункционального белка с различной внутриклеточной локализацией.Первоначально он был идентифицирован как косвенная связь между цитоплазматическим хвостом рецептора Е-кадгерина и актиновым цитоскелетом. Пул α-catenin, связанный с комплексами E-cadherin, взаимодействует с цитоскелетом под действием силы (Benjamin et al., 2010), что облегчает связывание α-catenin с др. Связывающими F-актин белками, чтобы поддерживать клеточно-клеточную адгезию. Однако α-катенин также локализуется в цитоплазме и ядре. В ядре α-катенин модулирует транскрипционную активность (Klezovitch, Vasioukhin, 2015), тем самым контролируя пролиферацию клеток.В цитоплазме α-catenin может регулировать везикулярный транспорт посредством своего взаимодействия с динамитином, белком, связывающим микротрубочки (Lien et al., 2008). Считается, что эти функции α-катенина в цитозоле не зависят от адгезии: клетка поддерживает различные пулы α-катенина в разных внутриклеточных сайтах, которые используются в различных процессах. В этом выпуске Wood et al. проливают свет на скрытую грань α-катенина: его локализацию в выступах мембраны и локальную модификацию структур актина, лежащих в основе миграции.

Принудительно индуцируя димеризацию α-катенина, исследователи обнаружили, что он преимущественно локализуется на плазматической мембране, вдали от адгезионных комплексов кадгерина в местах соединения. То, что α-catenin может димеризоваться, уже известно (Drees et al., 2005). Однако то, как образуются димеры α-катенина, их точная функция или локализация, остается неизведанной областью. Используя поверхностный плазмонный резонанс, Wood et al. (2017) продемонстрировали селективное сродство гомодимеров α-катенина к везикулам, нагруженным фосфолипидами, в частности фосфатидилинозитол-3,4,5-трифосфатом (PIP 3 ), тогда как мономеры α-катенина не обнаруживали связывания (рис.1).

мутанты α-катенина, неспособные взаимодействовать с PIP 3 , сохранили свою способность образовывать гомодимеры, предполагая, что связывание фосфоинозитидов не является существенным для взаимодействия с мембранами. Однако связывание PIP 3 может также способствовать образованию гомодимера α-катенина за счет увеличения локальной эффективной концентрации α-катенина в богатых PIP 3 сайтах на плазматической мембране. Авторы предполагают, что, наоборот, связывание фосфоинозитидов может вызывать конформационные изменения, которые благоприятствуют димеризации и ограничивают свободную диффузию (Wood et al., 2017). Эта интерпретация согласуется с пониженной способностью мономеров связывать PIP 3 и тем фактом, что константа диссоциации димеров α-catenin выше, чем концентрация цитозольного α-catenin (Drees et al., 2005). Альтернативно, возможно, что липид-связывающий карман в димерной структуре образуется за счет вкладов остатков на границе раздела между двумя мономерами α-катенина. Хотя авторы не смогли подтвердить последнее из-за разделения кристаллических структур димера α-катенина, ранее было показано, что общий карман между мономерами опосредует связывание фосфатидилинозитол-4,5-бисфосфата (PIP 2 ) в близком гомологе. винкулин (Chinthalapudi et al., 2014).

Действительно, ассоциация фосфолипидов с белками цитоскелета является известным механизмом модуляции их функции. Напр., Кэпирующий белок, как полагают, конкурентно связывается либо с быстрорастущим концом актиновых филаментов, либо с PIP 2 в плазматической мембране (Edwards et al., 2014). Эта регуляция позволяет клеткам быстро запускать всплеск полимеризации при продукции фосфоинозитидов, например, во время активации тромбоцитов.Напротив, он также позволяет клеткам быстро очищать актин от плазматической мембраны после таких событий, как фагоцитарное поглощение, когда актиновая оболочка больше не нужна и может препятствовать передаче.

Выводы Wood et al. (2017) поддерживают предполагаемый вклад фосфолипидов в организацию и регулирование клеточной архитектуры (Shewan et al., 2011). Результаты также добавляют новый поворот, демонстрируя глубокое влияние PIP 3 -зависимой локализации димера α-катенина на его функции цитоскелета.Предыдущая работа показала, что димеры α-катенина могут ослаблять полимеризацию с зазубринами на концах и актиновую активность комплексов Arp2 / 3 in vitro (Drees et al. , 2005) и защищать филаменты от разрыва (Hansen et al., 2013), отдавая предпочтение неразветвленным пучкам актина. Принудительно индуцируя димеризацию α-катенина, Wood et al. (2017) наблюдали, что димеры локализуются на непересекающихся мембранах и сильно индуцируют филоподии, которые длиннее и многочисленнее, чем в контроле. Эти филоподии считаются ключевыми структурами, которые инициируют межклеточные контакты, когда эпителиальные клетки сближаются.Т.о. рекрутирование плазматической мембраны посредством PIP 3 и образование димера α-catenin может происходить, когда клетки свободны от межклеточных контактов, как способ содействия прикреплению клетки к клетке и катализирования образования эпителиальной ткани. Эта двойная функция α-catenin, таким образом, хорошо сочетается с ролью как в стимулировании, так и в стабилизации межклеточной адгезии.

α-Катенин мутировал, чтобы отключить его взаимодействие с PIP 3 , включенный в комплексы E-кадгерина и совмещенный с F-актином in vitro, аналогично дикому типу. Интересно, что насильственная димеризация этого мутанта ослабляет механическую прочность межклеточных соединений. Возможно филоподии, которые предшествуют образованию межклеточных соединений, ранее описанное как механизм застегивания молний (Vasioukhin et al., 2000), важны для правильной сборки соединений и стабильности. В поляризованных эпителиальных клетках возможно, что локализация PIP 3 в базолатеральном домене (Shewan et al., 2011) потенциально обеспечивает сайты стыковки для димеров α-catenin на межклеточном интерфейсе, независимо от комплексов кадгерина.Можно предположить, что такие события могут модулировать свойства актинового цитоскелета на стыках таким образом, чтобы способствовать более стабильным адгезиям (т.е. продвигать линейные пучки F-актина).

Помимо образования протяженных филоподий, отображаемых димерами α-catenin, возможно, что димеризация α-catenin может влиять на рекрутирование сигнальных регуляторов на межклеточные контакты. Малым регуляторам GTPase, таким как фактор обмена ECT2 или белки, активирующие GTPase (GAPs) MgcRacGAP и DLC1, требуется α-катенин для их локализации на стыках (Braga, 2017).Однако, может ли их рекрутирование или удержание модулироваться гомодимерами α-catenin, пока не установлено. Альтернативно, поскольку большинство регуляторов GTPase содержат домен гомологии плекстрина, также возможно, что взаимодействие с липидами на плазматической мембране играет роль в их локализации, а взаимодействие α-катенина может локально модулировать их активность. Было показано, что такая регуляция резидентных белков cingulin и Ajuba инактивирует фактор обмена GEF-h2 и GAP CdGAP, соответственно (Braga, 2017).

В целом, недавно описанная димеризация и переключение функции α-катенина между плазматической мембраной и межклеточными контактами предполагает важную роль в установлении новых межклеточных контактов, а также поддержании существующих, которые могут способствовать тканям. разработка и реконструкция. Имеет смысл, что актин-связывающие белки будут иметь разные локализации и функции в клетках, когда они либо свободно мигрируют до образования ткани, либо собираются вместе, чтобы сформировать многоклеточные ткани.Будет интересно проверить, образуются ли димеры α-catenin также при повреждении тканей и участвуют ли в формировании филоподий в контексте заживления и восстановления ран.

димеров тимина на твердой фазе для конструирования димерсодержащей ДНК путем комбинированного химического и ферментативного синтеза: потенциально общий метод эффективного включения модифицированных нуклеотидов в ДНК | Исследование нуклеиновых кислот

Абстрактные

Возможность изучения взаимосвязи структура-активность димера тимина cis-syn , основного фотопродукта ДНК, в значительной степени зависит от наличия строительного блока, подходящего для его последовательного включения в олигонуклеотиды с помощью стандартной автоматизированной ДНК. синтез.К сожалению, его полезность скомпрометирована тем фактом, что для синтеза требуется шесть этапов с низким общим выходом и, как и в случае со всеми строительными блоками из фосфорамидита, он должен использоваться в большом количестве по сравнению с носителем в стандартном автоматическом синтезе. Чтобы увеличить полезность этого строительного блока, мы напрямую соединили его со стандартными носителями из стекла с контролируемыми порами, связанными с длинной цепью A, C, G и T, для получения твердофазного димера на носителе. Затем мы демонстрируем, что 13меры, содержащие 3'-концевую группу d (T [ cis - syn ] TN), синтезируются с этим носителем при 0.Масштаб 2 мкмоль может быть эффективно включен в более длинные олигонуклеотиды за счет удлинения праймера с помощью 3 '→ 5'-дефицитного по экзонуклеазе фрагмента Кленова или полимеразы Т4 и дНТФ или путем ферментативного лигирования ДНК-лигазой Т4 с другим олигонуклеотидом, противоположным комплементарной матрице. Сайт-специфичность и целостность димера тимина cis-syn как после удлинения праймера, так и после лигирования была подтверждена с помощью димер-специфического расщепления cis-syn эндонуклеазой V T4 denV V. Этот общий подход должен быть применим к синтезу многих типов сайт-специфичных модификаций нуклеиновых кислот и будет особенно полезен для тех, для которых требуемые строительные блоки дороги или трудны в изготовлении.

Введение

Строительные блоки, подходящие для сайт-специфического включения модифицированных нуклеотидов в олигонуклеотиды с помощью твердофазного автоматизированного синтеза на основе фосфорамидита, позволили создать широкий спектр зондов и инструментов как для молекулярных биологов, так и для химиков (1–6).Часто строительный блок можно экономично синтезировать в несколько этапов в больших количествах, так что большой избыток строительного блока рекомендуется для стандартных протоколов автоматического синтеза (10-, 50- и 150-кратный избыток для 10, 0,2 и 0,04 мкмоль масштабные синтезы соответственно) не имеет особого значения. В других случаях, однако, строительный блок требует множества стадий для синтеза или включает дорогостоящие изотопно-обогащенные реагенты или промежуточные соединения. В этих случаях довольно расточительно и дорого заправлять линии доставки реагентов и использовать большой избыток строительного блока, который не может быть восстановлен в легко пригодной для повторного использования форме из-за природы химического состава фосфорамидита.Кроме того, чтобы гарантировать наличие достаточного количества строительного блока для предполагаемого использования, часто приходится готовить больше, чем необходимо, и, как только он приготовлен, он часто имеет ограниченный срок хранения. Эти проблемы особенно актуальны для строительного блока, который был использован для секвенирования, специфичного для введения цис-син димера тимина 1 (рис. 1) в широкий спектр ДНК-субстратов для биофизики, репарации, репликации и in vivo. исследования мутагенеза (7–12).Этот строительный блок (соединение 2, рис. 1) может быть получен в восемь стадий из тимидина с общим выходом ~ 1% (13-15), что делает его довольно расточительным для включения в олигонуклеотиды стандартным автоматическим синтезом, особенно когда хотелось бы включить его в большое количество различных последовательностей. Чтобы обойти проблемы, связанные с использованием строительного блока димера тимина для каждого синтеза, мы разработали стабильные димеры на твердофазной подложке, которые можно использовать для включения димера в любой контекст последовательности путем сочетания синтетических и ферментативных стадий.Этот новый подход основан на способности полимераз нуклеиновых кислот и лигаз расширять олигонуклеотидную последовательность до 3'-стороны модификации (4, 16–22) и стандартного автоматизированного синтеза ДНК до 5'-стороны модификация. В принципе, этот подход можно также использовать для синтеза широкого спектра сайт-специфически модифицированных молекул ДНК и РНК.

Основная стратегия этого нового подхода состоит в том, чтобы сначала химически синтезировать олигонуклеотид, несущий модифицированный нуклеотид на 3'-конце или близко к нему, путем стандартного автоматического синтеза с использованием твердой подложки, несущей модифицированный нуклеотид.Затем, на втором этапе, удлините 3'-конец с помощью полимеразы и нуклеотидтрифосфатов напротив матрицы или путем химического или ферментативного лигирования с другим олигонуклеотидом. Расположение модифицированного нуклеотида по отношению к 3'-концу олигонуклеотида и, следовательно, способ, которым модифицированный нуклеотид должен быть прикреплен к твердой подложке, определяется способностью полимеразы или лигазы выдерживать модификацию. . Прямое присоединение 3'-гидроксила модифицированного нуклеозида к носителю через стандартную сложноэфирную связь может быть подходящим для модификаций, которые вызывают незначительное структурное искажение или не вызывают его вообще, таких как изотопомеры.При более структурно искажающих модификациях, таких как димер тимина cis-syn , было бы более разумным присоединить строительный блок фосфорамидита к A-, C-, G- или T-связанным LCAA-CPG (длинноцепочечный алкиламин стекло с контролируемыми порами) поддерживает. В этом случае 3'-конец олигонуклеотида, содержащего модифицированный нуклеотид, будет заканчиваться нормальным нуклеотидом и, как будет показано для димера cis-syn , делает возможным эффективное удлинение праймера и лигирование.

Рисунок 1

Структуры димера цис-син тимина, строительного блока, используемого для присоединения димера к нуклеозидам, поддерживаемым CPG, полученным димерам, поддерживаемым CPG, и олигонуклеотидам, используемым в этом исследовании. Bz, бензоил; iBu, изобутирл; ПЭ, удлинение грунтовки; R - рестрикционное расщепление Dpn II в сайте, указанном стрелкой; Т = Т, цис-син димер тимина.

Рисунок 1

Структуры димера тимина cis-syn , строительного блока, используемого для присоединения димера к нуклеозидам, поддерживаемым CPG, полученным димерам, поддерживаемым CPG, и олигонуклеотидам, используемым в этом исследовании.Bz, бензоил; iBu, изобутирл; ПЭ, удлинение грунтовки; R - рестрикционное расщепление Dpn II в сайте, указанном стрелкой; Т = Т, цис-син димер тимина.

Материалы и методы

Все олигодезоксинуклеотиды были синтезированы в масштабе 0,2 мкмоль на синтезаторе ABI 380B стандартным химическим методом β-цианоэтилфосфорамидита и очищены на препаративном препарате толщиной 2 мм × 165 мм длиной, 7 М мочевины, сшитого 1:19, 15% полиакриламидного геля 300 В. Олигодезоксинуклеотиды визуализировали светом 254 нм и обессоливали путем осаждения 1 об.0,3 М NaOAc и 3 об. этиловый спирт. Мечение 5'-конца осуществлялось [γ- 32 P] АТФ и полинуклеотидкиназой Т4 (New England Biolabs) в киназном буфере (70 мМ Tris-HCl, pH 7,6, 10 мМ MgCl 2 , 5 мМ DTT) согласно стандартным процедурам (23) с последующей экстракцией фенолом / хлороформом и осаждением 1 об. 0,3 М NaOAc и 3 об. этиловый спирт. Все образцы были разделены электрофорезом на 7 М мочевине толщиной 0,4 мм × 375 мм в 15% акриламидном геле с поперечными связями 1:19 при 1800 В. Фрагменты ДНК были визуализированы радиоавтографией с пленкой Kodak XAR-5 при - 70 ° C и количественно определено денситометрией на вычислительном денситометре 300A Molecular Dynamics.Полосы, соответствующие продуктам удлинения праймера, лигирования и расщепления эндонуклеазой V Т4 и Dpn II, корректировали на относительные количества продуктов -1 в праймерах.

Приготовление твердых носителей

цис-син , связанных димером тимина A, C, G и T

Строительный блок димера тимина цис-син был синтезирован с использованием того же пути синтеза, который использовался для синтеза dTpdU (15), который занимал семь этапов, начиная с тимидина (Sigma). Строительный блок 2 (4,4 экв.) Затем был соединен с дезоксинуклеозидами, нанесенными на CPG 10 мкмоль (размер пор 500 Å; CPG Inc.) в течение 1 часа, используя стандартный химический состав β-цианоэтилфосфорамидита на синтезаторе ABI 380B, с получением 3a- d с выходами, определенными анализом тритила, равными 90, 75, 87 и 52% соответственно. Затем их использовали для синтеза четырех 13-мерных праймеров 4a-d в масштабе ~ 0,2 мкм.

Удлинение праймера димер-содержащих олигонуклеотидов 4a-d экзо-фрагментом Кленова

Реакции проводили путем инкубации 2.6 пмоль (0,13 мкМ) праймеров с 5'-концом 4a-d с 26 пмоль (1,3 мкМ) 32-мерной матрицей 6, 2 U фрагмента экзо-Кленова и 100 мкМ дНТФ в 20 мкл 50 мМ трис-HCl, pH 7,5, 10 мМ MgCl 2 , 1 мМ DTT, 50 мМ NaCl при 25 ° C в течение ночи. Затем реакцию удлинения экстрагировали фенолом / хлороформом и осаждали этанолом. Одну треть смеси продуктов инкубировали с 10 ед. Dpn II в 10 мкл 100 мМ NaCl, 50 мМ бис-трис-HCl, pH 6,0, 10 мМ MgCl 2 , 1 мМ DTT при 37 ° C в течение 1 часа.Еще одну треть инкубировали с 448 ед. Эндонуклеазы V T4 denV в 10 мкл 32 мМ Трис-HCl, pH 8,3, 10 мМ EDTA, 100 мМ NaCl, 0,1 мг / мл BSA при 37 ° C. Через 1,5 ч добавляли 20 мкл 1,5 М водного пиперидина и смесь нагревали до 95 ° C в течение 30 минут, затем лиофилизировали и осаждали этанолом.

Лигирование димер-содержащих олигонуклеотидов 4a-d

Приблизительно по 3 пмоль каждого из четырех меченных 5'-концом 12меров 5a-d и по 3 пмоль каждого из четырех димер-содержащих 13меров 4a-d были отожжены с 32-мерной матрицей 6 в 18 мкл Т4 ДНК. лигазный буфер (55 мМ Трис-HCl, pH 7.8, 11 мМ MgCl 2 , 11 мМ DTT, 1,1 мМ АТФ, 28 мкг / мл БСА). После отжига смеси инкубировали при 0 ° C с 1 мкл ДНК-лигазы Т4 (400 ед. ) И дополнительно 1 мкл 25 мМ АТФ. Аликвоты удаляли в указанные моменты времени и проводили расщепление эндонуклеазой V T4 denV , как описано выше для реакций удлинения праймера.

Результаты и обсуждение

T = TC, T = TG, T = TA и T = TT Носители LCAA-CPG, соединения 3a-d, были получены с выходом ~ 52–90% с использованием цикла автоматического синтезатора для соединения 4.4 экв. цис-син димерный строительный блок 2 до 10 мкмоль A, C, G и T поддерживает соответственно в течение 1 часа. Носители тщательно промывали сухим ацетонитрилом, сушили в токе аргона и хранили при 4 ° C. Чтобы определить, могут ли олигонуклеотиды, заканчивающиеся на 3'-конце в T = TN, удлиняться полимеразами и лигироваться, были синтезированы 13-мерные праймеры 4a-d в масштабе 0,2 мкм вместе с 12-мерами 5a-d и комплементарной 32-мерной матрицей. 6 (рис. 1). Сайт рестрикции Dpn II был сконструирован в матрицу, чтобы сделать возможным расщепление продуктов удлинения праймера и, таким образом, избежать синтетически нежелательного включения дополнительных нуклеотидов на тупых концах с помощью 3 '→ 5'-дефицитных по экзонуклеазам полимераз (24, 25). Нестандартное добавление нуклеотидов не является проблемой, когда модифицированный олигонуклеотид включается в кольцевые дуплексы ДНК стандартными методами олигонуклеотид-направленного мутагенеза (обзоры см. 26, 27; некоторые конкретные примеры см. В 18, 28, 29).

Рисунок 2

Авторадиограмма денатурирующего полиакриламидного геля праймеров, содержащих димер с 5'-концом, 4a-d (дорожки P), их продуктов удлинения праймеров (дорожки PE) и Dpn II- Продукты удлинения, обработанные эндонуклеазой V- (дорожки Т4) (дорожки R) и T4 denV .

Рис. 2

Авторадиограмма денатурирующего полиакриламидного геля праймеров, меченных 5'-концом димер-содержащих праймеров 4a-d (дорожки P), их продуктов удлинения праймеров (дорожки PE) и Dpn II- (дорожки R) и T4 denV эндонуклеазой V- (дорожки T4), обработанные продуктами удлинения.

Когда димер-содержащие праймеры 4a-d инкубировали с 3 '→ 5'-дефицитным по экзонуклеазе фрагментом Кленова ДНК-полимеразы I (экзо-KF) (30) и dNTPs напротив 32-мерной матрицы, были получены полностью удлиненные продукты в выходы 94, 82, 82 и 78% (рис. 2). Во всех случаях после расщепления продуктов удлинения с помощью DpnII продуцировался только полноразмерный продукт, что указывает на отсутствие синтеза, опосредованного смещением. Сайт и целостность димера cis-syn в продуктах удлинения были подтверждены инкубацией с cis-syn димер-специфической эндонуклеазой V T4 denV (31-33).Этот фермент репарации расщепляет ДНК на участке димера путем гидролиза гликозидной связи в 5'-Т димера и в процессе реакций β- и δ-элиминирования, которые могут быть доведены до завершения путем нагревания с пиперидином, образует цепь перерыв (34, 35). Способность экзо-KF расширять димер-содержащие праймеры согласуется со способностью фрагмента Кленова включать ряд модифицированных нуклеотидтрифосфатов в ДНК (4). Также было обнаружено, что высокопроцессивная ДНК-полимераза Т4 с повышенным уровнем экзонуклеаз удлиняет димер-содержащие праймеры с выходом> 86%, хотя наблюдались некоторые продукты экзонуклеолитической деградации 3 '→ 5'.Другой высокопроизводительный, но дефицитный по экзонуклеазе фермент, ДНК-полимераза экзо-Т7 (Sequenase version 2.0) (36), также не удлинял праймеры. Когда 3'-концевой нуклеотид был намеренно удален из димер-содержащих 13меров 4a-d под действием 3 '→ 5' экзонуклеазной активности полимеразы Т4, ни один из полученных праймеров, заканчивающихся димером, не мог быть удлинен экзонуклеазой. -KF.

Рисунок 3

Авторадиограмма денатурирующего полиакриламидного геля для электрофореза реакционных смесей лигирования меченных 5'-концом олигонуклеотидов 4a-d, в течение указанного времени (в часах) и продуктов расщепления T4 denV эндонуклеаза V.

Рисунок 3

Авторадиограмма денатурирующего полиакриламидного геля для электрофореза реакционных смесей лигирования меченных 5'-концом олигонуклеотидов 4a-d, в течение указанного времени (в часах) и продуктов расщепления T4 denV эндонуклеаза V.

Чтобы определить, можно ли также использовать лигирование для получения внутренних димер-содержащих олигонуклеотидов, ДНК-лигазу Т4 и АТФ инкубировали с четырьмя димер-содержащими 13-мерами 4a-d, вместе с 12-мерами 5a. -d, при наличии дополнительного 32-мерного шаблона 6 (рис.3). Лигирование было почти количественным во всех случаях, за исключением праймера, содержащего димер, оканчивающегося на G, что привело только к 57% лигированию через 24 часа. И снова сайт и целостность димера cis-syn были подтверждены последующей обработкой эндонуклеазой V T4 denV .

Заключение

В заключение мы показали, что можно сконструировать цис-син -содержащих димер тимина олигонуклеотидов посредством стабильного, легко поддающегося манипулированию димера на твердой фазе.В этом исследовании для приготовления носителя использовали избыток димера тимина фосфорамидита, но в случаях, когда желательно сохранить модифицированный фосфорамидит, можно использовать один или менее эквивалентов. Аналогичным образом сайт рестрикционного фермента типа II был сконструирован в продукт ДНК для процедуры удлинения праймера, но для устранения ограничений последовательности в модифицированном олигонуклеотиде вместо него мог быть использован сайт рестрикционного фермента типа IIS. В отличие от ферментов рестрикции типа II, ферменты рестрикции типа IIS независимо расщепляют последовательность на определенном расстоянии от своего сайта узнавания (37).Помимо того, что эта методология полезна для включения димеров цис-син в ДНК, эта методология также должна быть применима к широкому спектру модифицированных нуклеотидов, хотя точный характер модификации может диктовать, сколько нуклеотидов, если таковые имеются, требуется для 3'-сторона модификации, позволяющая дальнейшее удлинение полимеразами или системами лигирования. Что касается масштаба, описанные процедуры, по-видимому, ограничиваются <1 нмоль, исходя из стоимости коммерчески доступных ферментов и неоптимизированных соотношений фермента к субстрату, описанных здесь. Истинный предел метода может фактически находиться в диапазоне 10–100 нмоль, однако, как мы показали, фотоповрежденные олигонуклеотиды могут быть лигированы в масштабе 2 нмоль с выходом> 10% только с примерно четырехкратным количеством описанной ДНК-лигазы. здесь для 3 пмоль (34). С другой стороны, существуют эффективные неферментативные методы для синтеза 5'-фосфорилированных олигонуклеотидов (38) и для матричного лигирования олигонуклеотидов (39–41), оба из которых были использованы для получения микромолярных количеств лигированных продуктов с чистотой подходит для ЯМР-исследований (42).Таким образом, пока модификация является стабильной по отношению к задействованным реагентам, можно использовать процедуру химического лигирования вместо ферментативной для получения сайт-специфически модифицированных олигонуклеотидов в количествах 1–10 мкмоль, необходимых для ЯМР и кристаллографических исследований. .

Благодарности

Эта работа была поддержана грантом NIH CA40463 и стипендией GANN для P. O. (Грант Министерства образования P200A20106). Мы благодарим Брайана Уорда из Sigma Chemical Co.за предложение использовать димеры на твердой подложке и Стивен Ллойд для щедрого подарка эндонуклеазы T4 denV V.

Ссылки

1,. ,

Тетраэдр

,

1993

, т.

49

(стр.

6123

-

6194

) 2,. ,

Angew. Chem. Int. Эдн Инглиш

,

1991

, т.

30

(стр.

613

-

722

) 3. ,

Олигонуклеотиды и аналоги: практический подход

,

1991

New York, NY

IRL Press

4.,

Bioconjugate Chem.

,

1990

, т.

1

(стр.

165

-

187

) 5,. ,

Chem. Res. Toxicol.

,

1988

, т.

1

(стр.

1

-

18

) 6,,. ,

Curr. Мнение. Struct. Биол.

,

1996

, т.

6

(стр.

527

-

533

) 7. ,

В соотв. Chem. Res.

,

1994

, т.

27

(стр.

76

-

82

) 8. ,

Pure Appl. Chem.

,

1995

, т.

67

(стр.

183

-

190

) 9,,,,,,. ,

Ячейка

,

1995

, т.

83

(стр.

773

-

782

) 10,,,,,,. ,

Биохимия

,

1995

, т.

34

(стр.

4601

-

4609

) 11,,,,,,,,,. ,

Biochemistry

,

1994

, vol.

33

(стр.

57

-

64

) 12,.,

Proc. Natl. Акад. Sci. США

,

1995

, т.

92

(стр.

11975

-

11979

) 13,,. ,

J. Am. Chem. Soc.

,

1987

, т.

109

(стр.

6735

-

6742

) 14,,. ,

Nucleic Acids Res.

,

1990

, т.

18

(стр.

7279

-

7286

) 15,. ,

Тетраэдр

,

1991

, т.

47

(стр.

2579

-

2590

) 16,,,,.,

Biochemistry

,

1978

, vol.

17

(стр.

2077

-

2081

) 17,. ,

Biochemistry

,

1986

, vol.

25

(стр.

8430

-

8436

) 18,,. ,

Proc. Natl. Акад. Sci. США

,

1986

, т.

83

(стр.

8501

-

8505

) 19,. ,

Nucleic Acids Res.

,

1988

, т.

16

(стр.

11339

-

11353

) 20,,.,

Nucleic Acids Res.

,

1993

, т.

21

(стр.

1563

-

1568

) 21,,,,. ,

Biochemistry

,

1993

, vol.

32

(стр.

12793

-

12801

) 22,,,,. ,

J. Am. Chem. Soc.

,

1997

, т.

119

(стр.

1131

-

1132

) 23,,. ,

Molecular Cloning: A Laboratory Manual

,

1989

, vol.

2

2-е изд.

Колд-Спринг-Харбор, Нью-Йорк

Лаборатория Колд-Спринг-Харбор Пресс

(стр.

1131

-

1132

) 24,,. ,

J. Mol. Биол.

,

1987

, т.

198

(стр.

123

-

127

) 25. ,

Nucleic Acids Res.

,

1988

, т.

16

(стр.

9677

-

9686

) 26. ,

Annu. Преподобный Жене.

,

1985

, т.

19

(стр.

423

-

462

) 27,,. ,

Annu. Преподобный Жене.

,

1981

, т.

15

(стр.

265

-

294

) 28,. ,

Биохимия

,

1988

, т.

27

(стр.

3210

-

3215

) 29,. ,

Biochemistry

,

1993

, vol.

32

(стр.

472

-

481

) 30,,,,,,. ,

Наука

,

1988

, т.

240

(стр.

199

-

201

) 31,,.,

Ремонт ДНК и мутагенез

,

1995

Вашингтон, округ Колумбия

ASM Press

(стр.

164

-

166

) 32,. ,

Nucleic Acids Mol. Биол.

,

1994

, т.

8

(стр.

217

-

226

)

33,,. ,

Nucleic Acids Res.

,

1994

, т.

22

(стр.

2817

-

2822

) 34,. ,

J. Biol. Chem

,

1993

, т.

268

(стр.

11143

-

11151

) 35,. ,

Биохимия

,

1995

, т.

34

(стр.

8796

-

8803

) 36,. ,

J. Biol. Chem.

,

1989

, т.

264

(стр.

6447

-

6458

) 37,,,. ,

Gene

,

1991

, т.

100

(стр.

13

-

26

) 38,. ,

Tetrahedron Lett.

,

1986

, т.

27

(стр.

4705

-

4708

) 39,.,

Biochemistry

,

1986

, vol.

25

(стр.

7423

-

7430

) 40,,,. ,

Nucleic Acids Res.

,

1988

, т.

16

(стр.

3721

-

3738

) 41,,,. ,

Nucleic Acids Res.

,

1991

, т.

19

(стр.

3067

-

3072

) 42,. ,

J. Am. Chem. Soc.

,

1991

, т.

30

(стр.

2927

-

2933

)

© 1997 Oxford University Press

Радиолиз димеров диметилтимина в кристаллическом состоянии на JSTOR

Четыре изомерных фотодимера диметилтимина (I син., Голова к голове, II анти, голова к голове, III син, голова к хвосту, IV анти, голова к хвосту) были облучены в кристаллическом состоянии с 60 Co γ- лучи. Единственным продуктом радиолиза всех четырех димеров является диметилтимин. Начальное значение G для этой реакции составляет 6300, 1700, 14 и 19 для димеров I, II, III и IV соответственно. Для всех четырех соединений значения G уменьшаются с увеличением конверсии димера в диметилтимин. Для I и II начальные значения G ниже для более мелких и менее совершенных кристаллов. В водном растворе радиолиз протекает по другому механизму, и диметилтимин является лишь второстепенным продуктом реакции. В этом случае значения G для разрушения I, II, III и IV равны 1.2, 1.5, 1.2 и 1.2 соответственно. Для радиолиза в кристаллическом состоянии обсуждается возможность механизма цепной реакции.

Radiation Research публикует статьи, посвященные воздействию радиации и связанным темам в области физики, химии, биологии и медицины, включая эпидемиологию и трансляционные исследования. Термин «излучение» используется в самом широком смысле и включает, в частности, ионизирующий и ультрафиолетовый, видимый и инфракрасный свет, а также микроволны, ультразвук и тепло. Связанные темы включают (но не ограничиваются ими) исследования с химическими агентами, способствующими пониманию эффектов радиации, изотопных методов, а также методов и приборов дозиметрии.

Общество радиационных исследований преследует три цели: Поощрять самым широким образом продвижение радиационных исследований во всех областях естественных наук; Содействовать совместным исследованиям между дисциплинами физики, химии, биологии и медицины в изучении свойства и эффекты излучения; Содействовать распространению знаний в этих и смежных областях посредством публикаций, встреч и образовательных симпозиумов.

.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *