Аб 4 т 230 м1: Электроагрегат бензиновый АБ-4-Т/230-М1: продажа, цена в Туле. Электрогенераторы от «ООО «Стэнлипол-Проект»»

Генераторы

Генератор	Род тока	Напряжение	Частота	Мощность	Применяемость
ГАБ-1-П/30	Постоянный	30 В		1кВт	Электроагрегат АБ1-П/30
ГАБ-4-Т230	Переменный трёхфазный	230 В	50 Гц	4 кВт	Электроагрегаты  АБ4-Т/230-М1  АБ4-Т/230-М1-Ж
ГАБ-4-Т/400	Переменный трёхфазный	400 В	50 Гц	4 кВт	Электроагрегат  АБ4-Т/400-М1
ГАБ-4-О/230	Переменный однофазный	230 В	50 Гц	4 кВт	Электроагрегат  АБ4-О/230-М1
БВЕИ 525754. 012	Переменный однофазный	230 В	50 Гц	4 кВт	Электроагрегат  АБ4-230-В АБ4-230-ВМ4 АД4-230-ВМ1 АД4-230-ВМ2
БВЕИ 525754.012-01	Переменный трёхфазный	230 В	50 Гц	4 кВт	Электроагрегат  АБ4-Т230-В-Ж АБ4-Т230-ВМ4-Ж АД4-Т230-ВМ1-Ж АД4-Т230-ВМ2-Ж
БВЕИ 525754.012-02	Переменный трёхфазный	400 В	50 Гц	4 кВт	Электроагрегат  АБ4-Т400-В АБ4-Т400-ВМ4 АД4-Т400-ВМ1 АД4-Т400-ВМ2
БВЕИ 525754.012-06	Переменный трёхфазный	400 В	50 Гц	6 кВт	Электроагрегат АД6-Т400-ВМ2 Сварочное оборудование завода «Уралтермосвар» такое как: АДД, АДПР, АДДУ, РТМ-160С, Т10-МБ, УСН-400, УСН-2  и другое
БВЕИ 525754. 013-04	Переменный трёхфазный	400 В	50 Гц	4 кВт
БВЕИ 525754.013-06	Переменный трёхфазный	400 В	50 Гц	6 кВт
ДГС-82-4ЩФ2	Переменный трёхфазный	400 В	50 Гц	20 кВт	Электроагрегат  АД-20-Т400-М
ДГС-92-4М	Переменный трёхфазный	400 В	50 Гц	50 кВт	Электроагрегат АД-50-Т400
ДГС-92-4М	Переменный трёхфазный	230 В	50 Гц	50 кВт	Электроагрегат АД-50-Т230
ГСФ-100М	Переменный трёхфазный	400 В	50 Гц	100 кВт	Электроагрегат АД-100-Т400
ГСФ-100М	Переменный трёхфазный	230 В	50 Гц	100 кВт	Электроагрегат АД-100-Т230

Аб-4-т/230-м1 инструкция — sugtkjj

12 Mar 15 — 05:18

Аб-4-т/230-м1 инструкция

Скачать Аб-4-т/230-м1 инструкция

Информация о файле:
Добавлен: 12. 03.2015
Скачали: 181
Рейтинг: 451 из 1342
Скорость загрузки: 24 Mbit/s
Файлов в категории: 84

Агрегаты бензоэлектрические унифицированные переменного тока типа АБ-4-Т/230-М1 предназначены для использования в качестве автономных

Тэги: инструкция аб-4-т/230-м1

Недавние поисковые запросы:

аннотация к журналу новое литературное обозрение 3

аннотация на повесть карамзина бедная лиза

агентские договора в букмекерском бизнесе

27 нояб. 2011 г. — Загрузить АБ-2-О/230-М1, АБ-2-Т/230-М1, АБ-4-О/230-М1, АБ-4-Т/230-М1, АБ-4-Т/400-М1 Техническое описание и инструкция 18 нояб. 2011 г. — Недавно завел-таки свой АБ-4-0-230-М1. по настройке карбюратора не смог найти — на форуме инструкция этот момент обходит. ВВЕДЕНИЕ. Настоящее техническое описание и инструкция по эксплуатации переменного тока типов АБ-2-О/230-М1, АБ-2-Т/230-М1, АБ-4-О/230-М1,

9. контакты, чтобы купить электростанция аб-2-т 230 м1. бензиновая аб-1-о230 (двигатель 2сд-м1) новая + инструкция по эксплуатации. 276. 199. 13 июня 2011 г. — Название: Агрегаты дизель-электрические типов АД-10-Т-230 и АД-10-Т-400. Краткое описание и инструкция по эксплуатации. тока АБ-2-0/230-М1, АБ-2-Т/230-М1, АБ-4-0/230-М1, АБ-4-Т/230-М1, АБ-4-Т/400-М1.30 окт. 2010 г. — Настоящее техническое описание и инструкция по эксплуатации рисунках1 и2, АБ-4-О/230-М1, АБ-4-Т/230-М1, АБ-4-Т/400-М1 на ручкой без аккума никада не пускал, да и в инструкции на гену писано «1.4.4.1. Самовозбуждение генератора Самовозбуждение АБ-2-О/230-М1. АБ-2-Т/230-М1. АБ-4-О/230-М1. АБ-4-Т/230-М1. АБ-4-Т/400-М1. Техническое описание и инструкция. по эксплуатации. ОБА.140.065 ТО.

автоклав gsv r 12 инструкция, wxmenu пример
Срочно нужна справка, Увеличение работ по договору, Получение справки из регистрационной палаты, Инструкция вышивка лентой, Документальный фильм о 12 заставе.

ТБ-1 (АНТ-4) Фото. Видео. Вооружение. ТТХ. Скорость

Новейшие лучшие военные самолеты ВВС России и мира фото, картинки, видео о ценности самолета-истребителя как боевого средства способного обеспечить «господство в воздухе», была признана военными кругами всех государств к весне 1916 г. Это потребовало создания боевого специального самолета, превосходящего все остальные по скорости, маневренности, высоте и применению наступательного стрелкового вооружения. В ноябре 1915 г. на фронт поступили самолеты-бипланы Ньюпор II Вебе. Это первый самолет, построенный во Франции, который предназначался для воздушного боя.

Самые современные отечественные военные самолеты России и мира обязаны своим появлением популяризации и развитию авиации в России которому способствовали полеты русских летчиков М. Ефимова, Н. Попова, Г. Алехновича, А. Шиукова, Б. Российского,, С. Уточкина. Стали появляться первые отечественные машины конструкторов Я. Гаккеля, И. Сикорского, Д. Григоровича, B.Слесарева, И. Стеглау. В 1913 г. совершил первый полет тяжелый самолет «Русский витязь». Но нельзя не вспомнить первого создателя самолета в мире — капитана 1-го ранга Александра Федоровича Можайского.

Советские военные самолеты СССР Великой Отечественной войны стремились поразить войска противника, его коммуникации и другие объекты в тылу ударами с воздуха, что обусловило создание самолетаов-бомбардировщиков способных нести большой бомбовый груз на значительные расстояния.

Разнообразие боевых задач по бомбардировке неприятельских сил в тактическом и оперативной глубине фронтов привело к пониманию того факта, что их выполнение должно быть соизмеримо с тактико-техническими возможностям конкретного самолета. Поэтому конструкторским коллективам следовало решить вопрос специализации самолетов-бомбардировщиков, что и привело к возникновению нескольких классов этих машин.

Виды и классификация, последние модели военных самолетов России и мира. Было очевидно, что для создания специализированного самолета-истребителя потребуется время, поэтому первым шагом в этом направлении стала попытка вооружить уже существующие самолеты стрелковым наступательным оружием. Подвижные пулеметные установки, которыми начали оснащать самолеты, требовали от пилотов чрезмерных усилий, так как управление машиной в маневренном бою и одновременное ведение огня из неустойчивого оружия уменьшали эффективность стрельбы. Использование двухместного самолета в качестве истребителя, где один из членов экипажа выполнял роль стрелка, тоже создавало определенные проблемы, потому что увеличение веса и лобового сопротивления машины приводило к снижению ее летных качеств.

Какие бывают самолеты. В наши годы авиация сделала большой качественный скачок, выразившийся я значительном увеличении скорости полета. Этому способствовал прогресс в области аэродинамики, создания новых более мощных двигателей, конструктивных материалов, радиоэлектронного оборудования. компьютеризации методов расчетов и т. д. Сверхзвуковые скорости стали основными режимами полета истребителей. Однако гонка за скоростью имела и свои негативные стороны — резко ухудшились взлетно-посадочные характеристики и маневренность самолетов. В эти годы уровень самолетостроения достиг такого значения, что оказалось возможным приступить к созданию самолетов с крылом изменяемой стреловидности.

Боевые самолеты России для дальнейшего роста скоростей полета реактивных истребителей, превышающих скорость звука, потребовалось увеличить их энерговооруженность, повысить удельные характеристики ТРД, а также усовершенствовать аэродинамические формы самолета. С этой целью были разработаны двигатели с осевым компрессором, имевшие меньшие лобовые габариты, более высокую экономичность и лучшие весовые характеристики. Для значительного увеличения тяги, а следовательно, и скорости полета в конструкцию двигателя ввели форсажные камеры. Совершенствование аэродинамических форм самолетов заключалось в применении крыла и оперения с большими углами стреловидности (в переходе к тонким треугольным крыльям), а также сверхзвуковых воздухозаборников.

Tank Encyclopedia, первый онлайн-музей танков

• Современные немецкие прочие автомобили

Мариса Белхоте / 10 ноября 2021 г.

Германия (1991-1994 гг.) Боевая машина пехоты — 764 БМП-1 использовалось, около 580 модернизировано Во время холодной войны два немецких государства, …

Подробнее

Стэн Лучиан / 9 ноября 2021 г.

Стэн Лучиан / 9 ноября 2021 г.

Автор: Артуро Джусти / 8 ноября 2021 г.

Королевство Италия (1941-1943) и Итальянская Социальная Республика (1943-1945) Бронированный грузовик — неизвестные номера построили Renault ADR. ..

Подробнее

• Британские прототипы времен холодной войны

Автор: Эндрю Хиллс / 6 ноября 2021 г.

Соединенное Королевство (1984-86) Основной боевой танк — 1 построено Несмотря на постепенное ослабление Советского Союза в 1980-х …

Подробнее

Автор: MarkoPantelic / 5 ноября 2021 г.

Югославские партизаны (1943–1945) Самоходная артиллерийская установка — номер неизвестен Semovente L40 da 47/32 был итальянским легким…

Подробнее

• Французские колесные машины времен холодной войны

Мариса Белхоте / 1 ноября 2021 г.

Франция (1946-1952) Бронеавтомобиль — 40-64 б / у Французская армия в Индокитае изначально использовала большое количество разнообразных бронированных машин …

Подробнее

---

Энциклопедия танков ®: Место назначения для энтузиастов танков уже десять лет. 7 000 000 посетителей, 1300+ страниц

Если вы интересуетесь историей в целом и войной в частности, Энциклопедия танков — это место, где можно найти ВСЕ бронированные машины, которые когда-либо бродили по полю боя, от «наземных линкоров» Герберта Уэллса до новейших основных боевых танков, наши статьи охватывают все эпохи разработка брони и прикрытие широкого спектра конструкций бронетранспортеров, от мостовиков и инженерных машин до истребителей танков и десантников. Вы также можете найти статьи о «мягкой» технике, противотанковом вооружении, тактике, сражениях и технологиях.Десять лет ботанической одержимости гусеницами. Энциклопедия танков продолжает оставаться в стадии разработки, и именно здесь вы, читатель, можете помочь. Если вы заметили, что чего-то не хватает, добавьте это в наш список публичных предложений . И, пожалуйста, поддержите нас!

Четыре эпохи, которые мы освещаем:

Первая мировая война: грязь, колючая проволока и окопы Великобритания и Франция начали разработку танков для прорыва вражеских позиций. Они были предназначены для выхода на нейтральную полосу, но танк быстро превратился в машину для убийства, используемую в общевойсковых операциях.

Вторая мировая война: испытательный полигон для ведения бронетанковой войны: Впервые большое количество танков и бронетехники будут сражаться друг с другом. От джунглей атоллов Тихого океана до засушливой пустыни Ливии, ледяных и ветреных степей Советского Союза и дождливого бокса Нормандии.

Холодная война: Восток против Запада: Две противоположные сверхдержавы привели к расколу мира на Восток и Запад. США и СССР вместе со своими собственными альянсами создали новое поколение бронетехники, извлекая уроки из многочисленных прокси-войн.

Современная эра: актуальны ли танки ?: Несмотря на многочисленные пророки, возвещающие о гибели танков, броня по-прежнему является важной ветвью вооруженных сил мира. Нет никаких признаков того, что это скоро изменится, поскольку разработка танков продолжает адаптироваться к современным условиям боя.

Apple MacBook Pro 14 2021 M1 Pro Ноутбук в обзоре: сколько «Pro» вы получаете с базовой моделью?

Ожидания от нового MacBook Pro 14 были чрезвычайно высокими, и Apple не может удовлетворить их все.

Шасси по-прежнему очень хорошее, но при этом довольно громоздкое, а новый MacBook Pro 14 довольно тяжелый — 1,6 кг. Вторая и, вероятно, самая заметная особенность — это новая выемка на дисплее, которая выглядит не очень красиво, а также есть некоторые функциональные проблемы. В полноэкранном режиме элементы меню могут быть скрыты за выемкой, а символы могут исчезать за строкой меню. Apple создает дополнительную работу для разработчиков, и мы думаем, что в этом не было необходимости. Веб-камера 1080p лучше, чем раньше, но это еще не революция, которая могла бы оправдать вырез.

Изменения в клавиатуре носят в основном косметический характер. Да, сенсорной панели больше нет, и мы снова получаем обычные клавиши с тем же вертикальным размером, но основной механизм клавиш идентичен меньшему MacBook Pro 13. Учитывая толщину базового блока, мы хотели бы видеть. больше ключевых путешествий. В целом клавиатура однозначно неплохая, но в мобильном сегменте есть клавиатуры получше.

Следующий момент — возможность подключения. Apple возвращает порты, и это здорово, но вы ожидаете самых современных технологий, когда получаете устройство высокого класса.Thunderbolt 4 соответствует этому требованию, а HDMI 2.0 и Wi-Fi 6 с частотой 80 МГц — нет. Было бы неплохо и порт Ethernet, как и модуль 5G. В настоящее время все еще существует проблема с программным обеспечением новой macOS Monterey, поэтому некоторые внешние мониторы или док-станции могут вызывать некоторые проблемы или снижать скорость передачи по USB.

Новый 14,2-дюймовый дисплей обеспечивает отличное качество изображения и может достигать экстремальных уровней яркости с содержимым HDR. Однако стандартное содержимое SDR ограничено 500 нит.

Новый дисплей действительно потрясающий, и это определенно одна из лучших панелей, которые вы можете получить в настоящее время. В частности, содержимое HDR выглядит потрясающе, но спецификации яркости от Apple предназначены только для содержимого HDR. Если вы не работаете с HDR-контентом, максимальная яркость будет ограничена до 500 нит. Мы думаем, что Apple должна упомянуть об этом в официальных спецификациях, чтобы избежать разочарования. Мы также были бы признательны за большую яркость SDR для использования на открытом воздухе. Дисплей также страдает постоянным мерцанием ШИМ и длительным временем отклика.

Процессор впечатляет своей производительностью и превосходной эффективностью, что явно лучше, чем у текущих мобильных процессоров от Intel и AMD. Вентиляторы также очень тихие и действительно заметны только тогда, когда вы одновременно нагружаете процессор и графический процессор. В нашей модели начального уровня используется уменьшенная версия M1 Pro (вероятно, для повышения производительности и предоставления достаточного количества чипов), которая все еще немного ограничена стандартным адаптером питания мощностью 67 Вт. Для функции быстрой зарядки также требуется дополнительный блок питания мощностью 96 Вт.Вы могли бы сказать, что в первую очередь вам следует купить более дорогой SKU, но Apple продает эту базовую модель.

Как производительность, так и эффективность нового M1 Pro впечатляют, но не все в новом MBP 14 «Pro», потому что блок питания мощностью 67 Вт немного ограничивает производительность при комбинированных рабочих нагрузках CPU / GPU и некоторых возможностях подключения. стандарты также не актуальны.

Время работы от батареи очень хорошее, но в зависимости от сценария использования могут быть большие различия.Например, при просмотре HDR-фильма на полной яркости аккумулятор разряжается примерно за 4 часа. Если вы уменьшите яркость и используете содержимое SDR (например, наш Wi-Fi или видео-тест), вы получите время автономной работы более 13 часов. Новая аудиосистема с шестью динамиками также чрезвычайно хороша и в настоящее время не имеет конкуренции в мобильном сегменте.

В целом, новый MacBook Pro 14 — действительно впечатляющий мультимедийный ноутбук, несмотря на некоторые незначительные проблемы. Тем не менее, вы должны иметь возможность использовать дополнительную производительность, и вас должно не волновать увеличение веса.Обычные пользователи, вероятно, никогда не заметят разницы в производительности по сравнению с обычным MacBook Pro 13 M1 или Air M1 в повседневных ситуациях, поэтому единственными реальными преимуществами будут лучшие мини-светодиодные дисплеи, а также улучшенная звуковая система. Мы считаем, что MacBook Air M1 по-прежнему остается лучшим выбором для многих пользователей, особенно с учетом соотношения цены и качества.

SEC.gov | Превышен порог скорости запросов

Чтобы обеспечить равный доступ для всех пользователей, SEC оставляет за собой право ограничивать запросы, исходящие от необъявленных автоматизированных инструментов.Ваш запрос был идентифицирован как часть сети автоматизированных инструментов за пределами допустимой политики и будет обрабатываться до тех пор, пока не будут приняты меры по объявлению вашего трафика.

Пожалуйста, объявите свой трафик, обновив свой пользовательский агент, включив в него информацию о компании.

Чтобы узнать о передовых методах эффективной загрузки информации с SEC.gov, в том числе о последних документах EDGAR, посетите sec.gov/developer. Вы также можете подписаться на рассылку обновлений по электронной почте о программе открытых данных SEC, в том числе о передовых методах, которые делают загрузку данных более эффективной, и о SEC. gov, которые могут повлиять на процессы загрузки по сценарию. Для получения дополнительной информации обращайтесь по адресу [email protected]

Для получения дополнительной информации см. Политику конфиденциальности и безопасности веб-сайта SEC. Благодарим вас за интерес к Комиссии по ценным бумагам и биржам США.

Код ссылки: 0.7ecef50.1636608572.3cc936e1

Дополнительная информация

Политика безопасности в Интернете

Используя этот сайт, вы соглашаетесь на мониторинг и аудит безопасности.В целях безопасности и обеспечения того, чтобы общедоступная услуга оставалась доступной для пользователей, эта правительственная компьютерная система использует программы для мониторинга сетевого трафика для выявления несанкционированных попыток загрузки или изменения информации или иного причинения ущерба, включая попытки отказать пользователям в обслуживании.

Несанкционированные попытки загрузить информацию и / или изменить информацию в любой части этого сайта строго запрещены и подлежат судебному преследованию в соответствии с Законом о компьютерном мошенничестве и злоупотреблениях 1986 года и Законом о защите национальной информационной инфраструктуры 1996 года (см. Раздел 18 U.S.C. §§ 1001 и 1030).

Чтобы обеспечить хорошую работу нашего веб-сайта для всех пользователей, SEC отслеживает частоту запросов на контент SEC.gov, чтобы гарантировать, что автоматический поиск не влияет на возможность доступа других лиц к контенту SEC.gov. Мы оставляем за собой право блокировать IP-адреса, которые отправляют чрезмерное количество запросов. Текущие правила ограничивают пользователей до 10 запросов в секунду, независимо от количества машин, используемых для отправки запросов.

Если пользователь или приложение отправляет более 10 запросов в секунду, дальнейшие запросы с IP-адреса (-ов) могут быть ограничены на короткий период.Как только количество запросов упадет ниже порогового значения на 10 минут, пользователь может возобновить доступ к контенту на SEC.gov. Эта практика SEC предназначена для ограничения чрезмерного автоматического поиска на SEC.gov и не предназначена и не ожидается, чтобы повлиять на людей, просматривающих веб-сайт SEC. gov.

Обратите внимание, что эта политика может измениться, поскольку SEC управляет SEC.gov, чтобы гарантировать, что веб-сайт работает эффективно и остается доступным для всех пользователей.

Примечание: Мы не предлагаем техническую поддержку для разработки или отладки процессов загрузки по сценарию.

ULX Руководство пользователя

Все системы включают стандартный разнесенный приемник ULXS4 или профессиональный разнесенный приемник ULXP4.

Переносные системы

включают в себя петличный, головной или инструментальный микрофон.

Портативные системы включают выбор сменных микрофонных головок.

Гитарные системы включают кабель от 1/4 дюйма на 4-контактный мини.

Приемники

ULXP4 включают оборудование для монтажа в стойку.

Активные антенны

Антенные разъемы на приемнике ULX обеспечивают 12 В постоянного тока для антенн активной цепи.

Осторожно: Для обеспечения наилучшей работы используйте только аксессуары для антенн Shure. Не используйте разветвители, сумматоры или антенны, обеспечивающие заземление постоянного тока, так как это может привести к неправильной работе приемника.

Антенные сумматоры и аксессуары

Входящие в комплект антенны можно подключать напрямую к разъемам ANTENNA типа BNC.Однако дополнительные аксессуары для установки антенны от Shure могут улучшить прием и уменьшить беспорядок в стойке. Используйте следующие рекомендации:

• Антенны и приемники должны быть из одного диапазона.
• Установите антенны на расстоянии более 40 см (16 дюймов) друг от друга.
• Используйте коаксиальный антенный кабель с малыми потерями Shure UA825 или UA850 (или любой 50-омный кабель с низкими потерями, например RG-8U).

Посетите www.shure.com для получения дополнительной информации об аксессуарах беспроводной антенны.

Коаксиальные кабели

Комплект передней антенны

1/2-волновая антенна в комплекте с системами ULXP4

Встроенный антенный усилитель

для длинных антенных кабелей

Комплект для монтажа антенны в стойку

Активная направленная антенна

для более целенаправленного приема

Усилитель-распределитель

объединяет антенны и источники питания для нескольких приемников

Ниже показаны варианты монтажа в стойку от одного до четырех приемников и перечислены необходимые аксессуары.

Выключатель питания

Разъем питания

Подключите с помощью прилагаемого адаптера переменного тока или сертифицированного запасного блока питания 14–18 В постоянного тока (550 мА).

Установка

Срок службы батареи

Используйте только щелочные или литиевые батареи 9 В. Типичный срок службы для обычных типов 9-вольтовых батарей указан ниже. Для получения подробной информации о характеристиках батареи обратитесь в Shure Applications Engineering.

Рекомендовано:

• Литий (16 часов)
• Щелочная (8 часов)

Не рекомендуется:

• Углерод-цинк (½ часа)
• Перезаряжаемый Ni-Cd (2 часа)
• Перезаряжаемый Ni-MH (2½ часа)

Примечание:

• Срок службы батареи зависит от типа и производителя.
• Батареи, хранящиеся более года или хранящиеся в чрезмерно жарких средах, могут выходить из строя чаще.
• Не используйте аккумуляторные батареи с полностью заряженным напряжением более 9 В (например, 9,6 В).
Для работы передатчикам
• требуется минимум 6 В.

Переключатель питания / отключения звука

• Выключите передатчик, чтобы отключить микрофон или сэкономить заряд батареи.
• Используйте функцию блокировки, чтобы избежать случайного отключения микрофона во время выступления.

Индикатор питания (BAT)

Зеленый: готов

Красный: низкий заряд батареи

Примечание: Оставшийся срок службы батареи зависит от типа батареи.

Индикатор заряда батареи

На ЖК-дисплее передатчика и приемника отображается приблизительное оставшееся время работы передатчика.

Если вы столкнулись с беспроводными помехами, выполните сканирование каналов на приемнике и используйте выбранный канал. Обычно менять группу не нужно.

Чтобы добиться максимальной производительности, настройте все беспроводные системы на разные каналы из одной группы. Эти каналы выбраны для совместной работы.

Выполните следующие действия при использовании сканирования групп и каналов с несколькими системами.

1. Выключите все системные передатчики. Включите все другие беспроводные или цифровые устройства, как если бы они были во время выступления или презентации.
2. На первом приемнике: Выполните групповое сканирование. Отметьте выбранную группу, затем используйте сканирование каналов, чтобы найти первый открытый канал в этой группе.
3. Включите первый передатчик и установите его на выбранную группу и канал.
4. ВАЖНО: Оставьте первый передатчик включенным при настройке следующей системы.
5. Для каждой дополнительной системы: Установить в ту же группу, что и первая. Выполните сканирование каналов и установите приемник и передатчик на выбранный канал.
6. Оставьте каждый передатчик включенным при настройке дополнительных систем.

Примечание:

• Устанавливайте передатчики на расстоянии не менее двух метров (6 футов) друг от друга.
• При использовании систем из разных диапазонов настройте все системы из одного диапазона вместе.

Совет: Чтобы сократить время настройки, вы можете вручную настроить группу и каналы до прибытия на место проведения.Посетите www.shure.com для получения списка групп и каналов, которые, как ожидается, не будут подвергаться помехам в конкретном городе или регионе.

Сканирование каналов

Эта функция выполняет поиск открытого канала в выбранной группе.

Групповое сканирование (только ULXP4)

Функция «группового сканирования» на ULXP помогает максимизировать количество систем, которые вы можете установить в одном месте. Он сканирует беспроводные помехи и находит группу с наиболее открытыми каналами.

Если вы столкнулись с беспроводными помехами, установите приемник и передатчик на другой канал или группу.

Изменить канал

Изменить группу

* Примечание: Вы можете изменить направление прокрутки, удерживая SET и нажимая MODE.

RF индикатор

Указывает на беспроводную активность по выбранному каналу.

Примечание: Когда горят индикаторы антенны и батареи, индикатор RF показывает мощность сигнала от передатчика.В противном случае он показывает помехи от другого источника. Выберите другой канал.

Антенный индикатор

Этот индикатор показывает, какая антенна принимает самый сильный сигнал от передатчика.

Отображение частоты

телевизор

Только для моделей, продаваемых в США. Отображает телеканал, занятый выбранной частотой.

Режим

Master List предлагает более точный выбор частоты для более крупных систем с несколькими системами.

Войдите в режим основного списка на приемнике или передатчике, удерживая кнопку SET в течение 10 секунд. Установите ГРУППУ и ​​КАНАЛ, как в обычном режиме.

Примечание: Устройство должно оставаться в режиме главного списка, чтобы работать на выбранной частоте.

Выйдите из режима Master List, удерживая кнопку SET в течение 10 секунд.

Заводские настройки обеспечивают оптимальную производительность для большинства установок.

Увеличение шумоподавления отфильтровывает все сигналы, кроме сигнала самого высокого качества, но это уменьшает рабочий диапазон.Уменьшение шумоподавления расширяет рабочий диапазон, но может увеличить шум сигнала.

Разъемы аудиовыхода

Симметричный XLR: Подключается к микшеру или другому профессиональному аудиовходу. Используйте переключатель MIC / LINE для настройки микрофонных или линейных входов.

Несимметричный, 6,35 мм (1/4 дюйма): Подключается к входам с высоким импедансом, например к гитарному усилителю.

Примечание: Переключатель LINE / MIC не влияет на разъем 6,35 мм (1/4 дюйма).

Регулирует уровень аудиовыходов ресивера.

Этот значок появляется, когда входной сигнал перегружает передатчик. Значок отображается в течение 2 секунд после обнаружения перегрузки входа.

Для достижения наилучшего качества звука отрегулируйте усиление передатчика так, чтобы мигали только зеленый и желтый светодиоды TX AUDIO. (Редкое свечение красного светодиода — это нормально.)

Зеленый = номинальный

Желтый = пик

Красный = перегрузка

ULX1

1. Установите переключатель аттенюатора (пэда) в положение 0 дБ для микрофонов и –20 дБ для гитар.(Некоторым приборам с низким выходом может не потребоваться затухание.)
2. При необходимости отрегулируйте усиление.

ULX2

• Полностью по часовой стрелке для тихого или нормального вокала.
• На полпути против часовой стрелки для громкого вокала.
• Полностью против часовой стрелки для рупоров или ударных инструментов.

Эта функция предотвращает случайное изменение настроек.

Разблокировка

Удерживайте кнопку SET, поворачивая колесико управления влево, вправо, влево.

Примечание: Если на ЖК-дисплее мигает УРОВЕНЬ, уменьшите ручку УРОВЕНЬ, чтобы продолжить. Эта функция защищает от внезапного повышения уровня при снятии блокировки.

Блокировка / разблокировка питания (Вкл.)

Удерживайте кнопки SET и MODE в течение четырех секунд или до появления значка замка.

Частота блокировки / разблокировки

Удерживайте кнопку SET при включении передатчика.

Нет питания: Проверьте соединения и напряжение аккумулятора и источника питания. Проверьте выключатель питания на передатчике.

На ЖК-дисплее отображается «E0 00» или аналогичный код: Выйдите из режима главного списка, удерживая кнопку SET в течение десяти секунд.

Невозможно выключить или изменить настройки на передатчике или приемнике: Интерфейс заблокирован. См. Раздел о блокировке интерфейса.

Нет звука: Если на приемнике не появляются индикаторы антенны и батареи, значит, он не принимает сигнал от передатчика.Убедитесь, что передатчик и приемник настроены на одну и ту же группу и канал.

Слабый или искаженный звук: Отрегулируйте усиление передатчика, переключатель аттенюатора поясного устройства и выходной уровень приемника.

Шум: Шум обычно возникает из-за помех от беспроводной сети или слабого сигнала от передатчика. См. Советы по повышению производительности системы.

Если вы столкнулись с помехами или пропаданием беспроводной сети, попробуйте следующее:

• Замените батарею передатчика новой щелочной батареей (избегайте перезаряжаемых батарей).
• Выберите другой частотный канал.
• Переместите антенны так, чтобы ничто не мешало прямой видимости передатчику (включая аудиторию).
• Избегайте размещения передатчика и приемника там, где может присутствовать металл или другие плотные материалы.
• Переместите приемник в верхнюю часть стойки для оборудования (или антенны для удаленного монтажа вне стойки).
• Удалите ближайшие источники беспроводных помех, такие как сотовые телефоны, двусторонние радиоприемники, компьютеры, медиаплееры и процессоры цифровых сигналов.
• Держите передатчики на расстоянии более двух метров (6 футов) друг от друга.
• Расположите передатчик и приемник на расстоянии более 5 метров (15 футов) друг от друга.
• Направляйте концы антенны приемника под углом 45 ° друг к другу и держите их подальше от крупных металлических предметов.
• Во время проверки звука отметьте «проблемные места» и попросите выступающих или исполнителей избегать этих мест.

Принадлежности в комплекте

Адаптер микрофонной стойки (ULX2)	WA371
Крышка ручки / переключателя (ULX2)	WA555
Сумка на молнии (ULX1)	95A2313
Сумка на молнии (ULX2)	95B2313
Отвертка (ULX2)	80A498

Дополнительные аксессуары

Комплект пассивного антенного разветвителя / сумматора	UA221
Линейный усилитель УВЧ	UA830WB
Направленная антенна УВЧ с питанием	UA874US
	UA874E
	UA874WB
	UA874X
Усилитель распределения мощности антенны УВЧ (U.S.A.)	UA844SWB
Усилитель-распределитель мощности антенны УВЧ (Европа)	UA844SWB-E
Усилитель распределения мощности антенны УВЧ (Великобритания)	UA844SWB-UK
Кабель BNC – BNC длиной 33 м (100 футов)	UA8100
Кабель BNC – BNC, 1,8 м (6 футов)	UA806
Панель стойки антенны	UA440
Комплект передней антенны (включает 2 кабеля и 2 переходника перегородки)	UA600
Кронштейн выносной антенны с переходником переборки BNC	UA505
Комплект для монтажа в стойку для одиночного приемника	UA506
Комплект для монтажа в стойку для двух приемников	UA507
Чемодан для переноски	WA610
Кабель адаптера микрофона (XLR)	WA310

Запасные части

Адаптер переменного тока (120 В переменного тока, 60 Гц)	PS41
Адаптер переменного тока (220 В переменного тока, 50 Гц)	PS41AR
Адаптер переменного тока (230 В переменного тока, 50/60 Гц)	ПС41АЗ
Адаптер переменного тока (230 В переменного тока, 50/60 Гц, европейская розетка)	PS41E
Адаптер переменного тока (230 В переменного тока, 50/60 Гц)	PS41UK
Адаптер переменного тока (100 В переменного тока, 50/60 Гц)	PS41J
SM58 ® Картридж с решеткой (ULX2 / 58)	RPW112
BETA 58A ® Картридж с решеткой (ULX2 / BETA 58)	RPW118
Картридж SM86 с решеткой (ULX2 / SM86)	RPW114
Картридж SM87A с решеткой (ULX2 / 87)	RPW116
Картридж BETA 87A с решеткой (ULX2 / BETA 87A)	RPW120
Картридж BETA 87C с решеткой (ULX2 / BETA 87C)	RPW122
Матовая серебристая решетка для SM58	RK143G
Матовая серебристая решетка для SM86	об / мин 226
Матовая серебристая решетка для BETA 58A	RK265G
Матовая серебристая решетка для BETA 87A	RK312
Черная решетка для SM87A	RK214G
Черная решетка для BETA 58A	об / мин 323G
Черная решетка для BETA 87A и BETA 87C	об / мин 324G
Зажим для ремня	44A8013A
1/4-волновая антенна (470 — 752 МГц)	UA400B
1/4-волновая антенна (774 — 952 МГц)	UA400
1/2 -волновая антенна (774-862 МГц)	UA820A
1/2-волновая антенна (638 — 698 МГц)	UA820L3
1/2 -волновая антенна (554-590 МГц)	UA820D
1/2 -волновая антенна (740-814 МГц)	UA820Q
1/2 волновая антенна (470 — 530 МГц)	UA820G
1/2 -волновая антенна (746 — 784 МГц)	UA820E
1/2 -волновая антенна (572 — 596 МГц)	UA820F
1/2-волновая антенна (578 — 638 МГц)	UA820J

Этикетка соответствия стандарту Industry Canada ICES-003: CAN ICES-3 (B) / NMB-3 (B)

Этот продукт соответствует основным требованиям всех соответствующих европейских директив и имеет право на маркировку CE.

Декларацию соответствия CE можно получить по адресу: www.shure.com/europe/compliance

Официальный представитель в Европе:

Shure Europe GmbH

Штаб-квартира Европа, Ближний Восток и Африка

Департамент: Сертификат EMEA

Jakob-Dieffenbacher-Str. 12

75031 Эппинген, Германия

Телефон: + 49-7262-92 49 0

Факс: + 49-7262-92 49 11 4

Эл. Почта: [email protected]

Сертифицировано в соответствии с FCC, часть 74.

Сертифицировано ISED в Канаде по RSS-123 и RSS-102.

Идентификатор FCC: DD4ULX1, DD4ULX2, DD4ULX1G3, DD4ULX2G3. IC: 616A-ULX1, 616A-ULX2.

Одобрено в соответствии с положением о декларации соответствия (DoC) FCC, часть 15.

Сертифицировано ISED в Канаде по RSS-123.

ЛИЦЕНЗИОННАЯ ИНФОРМАЦИЯ

Лицензирование: в некоторых областях может потребоваться министерская лицензия для эксплуатации этого оборудования. Проконсультируйтесь с вашим национальным органом власти относительно возможных требований. Изменения или модификации, явно не одобренные Shure Incorporated, могут лишить вас права на эксплуатацию оборудования. Лицензирование беспроводного микрофонного оборудования Shure является обязанностью пользователя, и возможность лицензирования зависит от классификации пользователя и области применения, а также от выбранной частоты. Shure настоятельно рекомендует пользователю связаться с соответствующим органом электросвязи относительно надлежащего лицензирования, а также перед выбором и заказом частот.

Информация для пользователя

Это устройство соответствует части 15 правил FCC.Эксплуатация возможна при следующих двух условиях:

1. Это устройство не должно создавать вредных помех.
2. Это устройство должно принимать любые помехи, включая помехи, которые могут вызвать сбои в работе.

Эти ограничения разработаны для обеспечения разумной защиты от вредных помех при установке в жилых помещениях. Это оборудование генерирует, использует и может излучать радиочастотную энергию и, если оно установлено и используется не в соответствии с инструкциями, может создавать вредные помехи для радиосвязи. Однако нет гарантии, что помехи не возникнут при конкретной установке. Если это оборудование действительно создает недопустимые помехи для радио- или телевизионного приема, что можно определить путем включения и выключения оборудования, пользователю рекомендуется попытаться устранить помехи одним или несколькими из следующих способов:

• Измените ориентацию или положение приемной антенны.
• Увеличьте расстояние между оборудованием и приемником.
• Подключить оборудование к розетке в цепи, отличной от той, к которой подключен приемник.
• Обратиться за помощью к дилеру или опытному специалисту по радио / телевидению.

Примечание. Тестирование на соответствие требованиям ЭМС основано на использовании поставляемых и рекомендуемых типов кабелей. Использование других типов кабелей может ухудшить характеристики ЭМС.

Предупреждение о беспроводной связи для Австралии

Это устройство работает под лицензией класса ACMA и должно соответствовать всем условиям этой лицензии, включая рабочие частоты. До 31 декабря 2014 года это устройство будет соответствовать требованиям, если оно будет работать в диапазоне частот 520–820 МГц. ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ: После 31 декабря 2014 года, в соответствии с требованиями, это устройство не должно работать в диапазоне 694–820 МГц.

Следуйте региональной схеме утилизации батарей, упаковки и электронных отходов.

RF Дальность связи

470 000–865 000 МГц

Рабочий диапазон

100 м (300 футов) типично

Частотный диапазон звукового сигнала

25 Гц

-15 кГц, ± 2 дБ

Модуляция

Компрессорно-расширительная система с девиацией ± 38 кГц с предыскажением и деактивацией

Динамический диапазон

> 100 дБ, A-взвешенный

Отклонение изображения

80 дБ, типично

Чувствительность RF

1.26 мкВ для SINAD 12 дБ, тип.

Ложное отклонение

75 дБ, типично

Совершенно бесшумный

Арт. Девиация ± 38 кГц с тоном 1 кГц

> 105 дБ, A-взвешенный

Полное гармоническое искажение

Арт. Девиация ± 38 кГц с тоном 1 кГц

0,3%, типично

Диапазон рабочих температур

от -20 ° C (-4 ° F) до 49 ° C (120 ° F)

Полярность

Положительное давление на диафрагму микрофона (или положительное напряжение, приложенное к наконечнику телефонного штекера WA302) создает положительное напряжение на контакте 2 (относительно контакта 3 выхода с низким импедансом) и на конце выхода с высоким сопротивлением 1/4 дюйма.

Срок службы батареи

от 8 до 9 часов (9 В щелочной)

ULX1

Диапазон регулировки усиления

25 дБ

Выключатель ослабления

0, −20 дБ

Размеры

96,5 x 67 x 26,7 мм (3,86 x 2,68 x 1,10 дюйма), В x Ш x Г

Масса

79 г (2,8 унции) без батареек

Требования к питанию

9 В щелочной

Входное сопротивление

1 МОм

Выходная мощность RF

30 мВт максимум

ULX2

Диапазон регулировки усиления

20 дБ

Размеры

SM58	229 x 51 мм (9 x 2 дюйма. ), L x Диаметр.
БЕТА 58	221 x 51 мм (8,7 x 2 дюйма), Д x Диаметр.
SM86	213 x 49 мм (8,4 x 1,9 дюйма), Д x Диаметр
SM87 / БЕТА 87	223 x 51 мм (8,8 x 2 дюйма), Д x Диаметр.

Масса

SM58 / БЕТА 58	289 г (10,2 унции) без батареек
SM86	251 г (8.8 унций) без батареек
SM87 / БЕТА 87	258 г (9,1 унции) без батареек

Требования к питанию

9 В щелочной

Выходная мощность RF

30 мВт максимум

ULXS4, ULXP4

Размеры

ULXS4	43 x 214 x 163 мм (1,72 x 8,56 x 6,52 дюйма), В x Ш x Г
ULXP4	43 x 214 x 172 мм (1. 72 x 8,56 x 6,88 дюйма), В x Ш x Г

Масса

ULXS4	1049 г (2 фунта, 5 унций)
ULXP4	1105 г (2 фунта 7 унций)

Требования к питанию

14–18 В постоянного тока (отрицательное заземление), 550 мА

G3E 470-506 МГц

Код страны Код оплаты Codice di paese Código de país Länder-Kürzel	Диапазон частот Частотная гамма Частотный диапазон Гама частот Frequenzbereich
A, B, BG, CH, CY, CZ, D, EST	470-506 МГц *
F, GB, GR, H, I, IS, L, LT	470-506 МГц *
NL, P, PL, S, SK, SLO	470-506 МГц *
ДК, ФИН, М, Н	*
HR, E, IRL, LV, RO, TR	*
все остальные страны	*

* Это оборудование может работать на некоторых частотах, не разрешенных в вашем регионе. См. Информацию о лицензировании.

J2 554-590 МГц

Код страны Код оплаты Codice di paese Código de país Länder-Kürzel	Диапазон частот Частотная гамма Частотный диапазон Гама частот Frequenzbereich
A, B, CH, D, E, F, GB	554 — 590 МГц *
GR, I, IRL, L, NL, P	554 — 590 МГц *
DK, FIN, N, S	*
все остальные страны	*

* Это оборудование может работать на некоторых частотах, не разрешенных в вашем регионе.См. Информацию о лицензировании.

K2E 606-642 МГц

Код страны Код оплаты Codice di paese Código de país Länder-Kürzel	Диапазон частот Частотная гамма Частотный диапазон Гама частот Frequenzbereich
A, BG, CH, CY, CZ, D, EST	606 — 642 МГц *
F, GB, GR, H, I, IS, L, LT	606 — 642 МГц *
P, PL, S, SK, SLO	606 — 642 МГц *
B, DK, FIN, M, N, NL	*
HR, E, IRL, LV, RO, TR	*
все остальные страны	*

* Это оборудование может работать на некоторых частотах, не разрешенных в вашем регионе. См. Информацию о лицензировании.

M2 662-698 МГц

Код страны Код оплаты Codice di paese Código de país Länder-Kürzel	Диапазон частот Частотная гамма Частотный диапазон Гама частот Frequenzbereich
A, B, CH, D, E, F, GB	662 — 698 МГц *
GR, I, IRL, L, NL, P	662 — 698 МГц *
DK, FIN, N, S	*
все остальные страны	*

* Это оборудование может работать на некоторых частотах, не разрешенных в вашем регионе.См. Информацию о лицензировании.

R4 784-820 МГц

Код страны Код оплаты Codice di paese Código de país Länder-Kürzel	Диапазон частот Частотная гамма Частотный диапазон Гама частот Frequenzbereich
A, B, CH, D, E, F, GB	784-820 МГц *
GR, I, IRL, L, NL, P	784-820 МГц *
ДК, №	800-820 МГц *
FIN	800. 1-819,9 МГц *
I, Великобритания, все другие страны	*

* Это оборудование может работать на некоторых частотах, не разрешенных в вашем регионе. См. Информацию о лицензировании.

S3 829-865 МГц

Код страны Код оплаты Codice di paese Código de país Länder-Kürzel	Диапазон частот Частотная гамма Частотный диапазон Гама частот Frequenzbereich
A, B, CH, D, E	829 — 865 МГц *
GR, IRL, L, NL, P	838-862 МГц *
ГБ	830-865 МГц *
DK, F, FIN, I, N, S	863 — 865 МГц *
все остальные страны	*

* Это оборудование может работать на некоторых частотах, не разрешенных в вашем регионе. См. Информацию о лицензировании.

Q2 748-784 МГц

Код страны Код оплаты Codice di paese Código de país Länder-Kürzel	Диапазон частот Частотная гамма Частотный диапазон Гама частот Frequenzbereich
A, B, CH, D, E, F, GB	748 — 784 МГц *
GR, I, IRL, L, NL, P	748 — 784 МГц *
DK, FIN, N, S	*
все остальные страны	*

* Это оборудование может работать на некоторых частотах, не разрешенных в вашем регионе.См. Информацию о лицензировании.

границ | Ускоренный и тяжелый волчаночный нефрит выигрывает от M1, активного метаболита гинсенозида, регулируя функции инфламмасомы NLRP3 и Т-клеток у мышей

Введение

Волчаночный нефрит (ЛН) подразделяется на шесть классов в зависимости от степени тяжести почечной патологии (1), и между классами наблюдается частая трансформация (2, 3). Острая индукция клеточных и / или гуморальных аутоиммунных ответов считается потенциальным механизмом, участвующим в патологических находках от очагового мезангиального до диффузного пролиферативного ЛУ (4-7), и последний может быть смоделирован мышиной моделью ускоренного и тяжелого ЛУ ( ASLN) у мышей NZB / WF1 (8–12).Следует отметить, что эпизоды бактериальных или вирусных инфекций как экологического вреда у генетически предрасположенных людей могут быть связаны с прогрессированием системной красной волчанки (СКВ) в ЛН (13). Высокие дозы кортикостероидов и / или цитотоксических агентов являются основным методом выбора для контроля тяжелого состояния почек (13, 14). Однако клинически системные побочные эффекты этих препаратов, используемых по отдельности или в комбинации, по-прежнему вызывают серьезную озабоченность (15, 16).

Семейство NOD-подобных рецепторов — пириновый домен, содержащий 3 (NLRP3) инфламмасомы, который контролирует активацию каспазы-1 и, в свою очередь, расщепляет про-IL-1β и про-IL-18 с образованием зрелых IL-1β и IL-18. (17–19) стал ключевым игроком в воспалительных реакциях и индукции адаптивного иммунитета, и получил поддержку как важный в содействии прогрессированию LN (19, 20).Кроме того, кумулятивные исследования показывают, что активные формы кислорода (АФК) действуют как вторичные мессенджеры, передача сигналов которых запускает образование и активацию инфламмасомы NLRP3 (21, 22). Недавно мы обнаружили, что неконтролируемая продукция IL-1β, IL-18 и ROS, а также активация Т-клеток вовлечены в активацию инфламмасомы NLRP3 на мышиной модели ускоренного и тяжелого LN (ASLN) (8, 9, 11). Следует отметить активацию NLRP3 инфламмасом в подоцитах LN и других клеток с помощью иммунного комплекса волчанки, что указывает на то, что инфламмасомы вносят вклад в развитие волчанки, включая LN (23-27).Следовательно, возможно, что ингибирование активации воспаления NLRP3 с течением времени может быть полезным для субъектов с LN или ASLN. Аутофагия играет жизненно важную роль в поддержании клеточного гомеостаза (28, 29). Недавно было показано, что аутофагия влияет на секрецию IL-1β макрофагами (30, 31) и контролирует продукцию IL-1β путем разложения про-IL-1β (30, 32). Более того, аутофагия оказывает ингибирующее действие на инфламмасому NLRP3 и может отрицательно регулировать врожденный иммунный ответ и воспаление (23, 33), в связи с чем различные исследования предполагают, что аутофагия служит негативным регулятором инфламмасомы NLRP3 в восстановлении гомеостаза тканей после повреждение при аутоиммунных заболеваниях, включая ЛУ (34–36).Кроме того, несколько исследований показали, что аутофагия может защитить подоциты от повреждения (37–39).

Циркулирующие дендритные клетки (ДК) могут локализоваться в клубочках при стимуляции ИЛ-18, тем самым запуская активацию Т-клеток и, как следствие, почечное повреждение активных ЛУ (40). Кроме того, у пациентов с активным и пролиферативным LN, T help (Th) и регуляторные T (Treg) клетки, как было показано, играют различную роль в развитии и прогрессировании аутоиммунного состояния (4, 41–43). Уменьшение количества клеток Th2, Th3 или Th27 и секреции их цитокинов, а также увеличение количества клеток Treg и секреция их иммунодепрессивных цитокинов могут облегчить тяжесть поражения почек у мышей NZB / WF1 путем ингибирования T клеточно-опосредованная транскрипция (42).

M1, основной абсорбируемый кишечным бактериальным метаболитом гинзенозидов, является основным биологически активным компонентом женьшеня (44–46). Было показано, что он обладает противовоспалительной активностью при индуцированном адъювантом артрите крыс (45) и мышиных макрофагах, индуцированных зимозаном, за счет снижения провоспалительных цитокинов (47).M1 может негативно регулировать NF-κB-опосредованный сигнальный путь и ингибировать продукцию провоспалительных цитокинов при росте опухоли и хроническом колите (48–50). Однако остается неизвестным, может ли M1 оказывать терапевтическое действие на аутоиммунный нефрит, особенно во время его обострения.

В настоящем исследовании мы показали, что чистое соединение оказывало свои положительные эффекты на мышиной модели ASLN путем ингибирования инфламмасомы NLRP3, дифференциальной регуляции активации Th-клеток и дифференцировки Treg-клеток и активации оси сиртуин 3 (SIRT3) / аутофагия. В соответствии с этими выводами, изобарический тег для относительного и абсолютного количественного анализа (iTRAQ) на основе протеомного анализа выявил подавленные сигнальные пути, связанные с активацией инфламмасомы почек NLRP3, у мышей ASLN, обработанных M1. Результаты предполагают, что M1 является терапевтическим кандидатом для пациентов с LN с потенциалом развития ускоренного и ухудшенного состояния, имитирующего резкое преобразование легкого нефрита в более высокий (тяжелый) LN.

Методы

M1 Подготовка

Для получения чистого соединения M1 листья китайской травы Panax notoginseng были приготовлены, как описано в нашем патенте США (US7932057B2).

Модель животного и протокол эксперимента

Все эксперименты на животных проводились с этического одобрения Институционального комитета по уходу и использованию животных Медицинского центра национальной обороны, Тайвань, в соответствии с Руководством NIH по уходу и использованию лабораторных животных . Модель мыши ASLN была создана на 8-недельных самках мышей NZB / WF1 (до производства аутоантител) (приобретенных в Jackson Laboratory, ME, США) с двукратными внутрибрюшинными инъекциями липополисахарида (LPS) (0.8 мг / кг массы тела, Sigma, Миссури, США), как описано ранее (8, 10). Через семь дней после первой инъекции LPS мышей разделили на 2 группы по 8 мышей в каждой и ежедневно получали либо M1 (50 мг / кг веса тела), либо носитель (кукурузное масло) через желудочный зонд. Соответствующие по возрасту самки мышей NZB / WF1, которым вводили физиологический раствор, служили нормальным контролем. Мышей умерщвляли на 3-й и 5-й неделе, соответственно, после индукции заболевания.

Клиническая и гистопатологическая оценка

Альбуминурию оценивали по соотношению альбумина мочи к креатинину мочи (Cr) (альбумин мочи / Cr), как описано ранее (8–11).Уровни азота мочевины крови (АМК) и Cr в сыворотке определяли, как описано ранее (9, 10). Фиксированные в формалине и залитые парафином срезы почек окрашивали гематоксилином и эозином (H&E), для чего определяли оценку гистопатологических изменений почек и активность гломерулонефрита для пациентов с LN, как описано ранее (51). Для иммуногистохимии (ИГХ) фиксированные раствором метил Карнуа и залитые парафином срезы ткани окрашивали против F4 / 80 ⁺ (Серотек, Северная Каролина, США) или CD3 ⁺ (пан Т-клетки; Дако, Глоструп, Дания). а замороженные срезы окрашивали против CD11c ⁺ (BioLegend, Калифорния, США), как описано ранее (11).Для иммунофлуоресцентного (IF) окрашивания LC3B культивированные клетки окрашивали против LC3B (Sigma). Для подсчета количества CD3 ⁺ -, F4 / 80 ⁺ — или CD11c ⁺ -положительных клеток использовали программное обеспечение для количественного анализа изображений (Pax-it; Paxcam, IL, USA), как описано ранее. (8).

Антиген-специфическая активация Т-клеток дендритными клетками костного мозга (BMDC)

Мононуклеоциты BM мыши были выделены из большеберцовых и бедренных костей 8-недельных самок мышей NZB / WF1.Клетки культивировали в присутствии фактора, стимулирующего колонии гранулоцитов-макрофагов (GM-CSF; 10 нг / мл) (Invitrogen, CA USA), в течение 6 дней для индукции дифференцировки мононуклеоцитов в DC, как описано ранее (52). Для активации антиген-специфических Т-клеток BMDC инкубировали с LPS (100 нг / мл) в течение 24 часов. Затем клетки подвергались импульсному воздействию пептида OVA _323-339 (1 мкг / мл, Genomics, Тайвань), стимулированного Т-клетками CD4 ⁺ , которые были получены из клеток лимфатических узлов трансгенных мышей OT-II (любезно предоставлены доктором Др.К. Лоуэлл, Калифорнийский университет, США). Затем измеряли антиген-специфическую активацию CD4 ⁺ Т-клеток, поглощение [3H] -тимидина (Amersham Pharmacia Biotech, Нью-Джерси, США), как описано ниже. Были приняты соотношения общего количества клеток для BMDC и CD4 ⁺ Т-клеток в 1: 2 для анализа пролиферации Т-клеток и продукции IL-17A и в 1: 8 для продукции IFN-γ соответственно.

Культура подоцитов и макрофагов

Условно иммортализованные подоциты мышей были получены от Dr.SJ Shankland (Медицинский факультет Вашингтонского университета, США) и культивировали при 37 ° C в присутствии IFN-γ (Roche, NJ, США) и дифференцировали в течение 13-15 дней при 37 ° C в отсутствие IFN-γ, как описано ранее (53). Клеточная линия мышиных макрофагов J774A.1 была приобретена из Американской коллекции типовых культур (США) и поддерживалась, как описано ранее (54).

Вестерн-блоттинг

Белковые лизаты обрабатывали на гелях SDS-PAGE, как описано ранее (8, 53, 55).Анти-NLRP3 (AdiopGen, Калифорния, США), IL-1β, каспаза-1, VEGF, TGF-β, β-актин (Санта-Крус, Техас, США), p-IκB, SIRT3 (Cell Signaling, Массачусетс, США) , Использовали антитела LC3B (Sigma), Atg5 (MBL, Япония), COX-2 или NADPH p47 ^phox (Santa Cruz).

[

³ H] Thymidine Incorporation

Пролиферация CD3 ⁺ Т-клеток в спленоцитах мыши и антиген-специфическая активация CD4 ⁺ Т-клеток с помощью BMDC измеряли поглощение [3H] -тимидина (Amersham Pharmacia Biotech) с использованием TopCount (Packard / PerkinElmer, Boston, MA), как описано ранее (52).Вкратце, мышиные спленоциты выделяли и культивировали в 96-луночных планшетах с плоским дном, покрытых в течение ночи антителом против CD3 мыши (BD Biosciences). Через 48 часов в культуры пульсировали 1 мкКи [ ³ H] тимидина (Amersham International, Бакингемшир, Великобритания), собирали через 16 часов и измеряли с помощью TopCount (PerkinElmer Life Sciences, Пало-Альто, Калифорния, США. ).

Проточная цитометрия

Мышиные спленоциты дважды окрашивали FITC-конъюгированными антимышиными CD3 ⁺ (17A2; пан Т-клетки) или CD4 ⁺ (GK1.5; хелперные Т-клетки) и конъюгированные с фикоэритрином антитела против CD69 ⁺ (h2.2F3) мыши (все от BD Biosciences, Калифорния, США). Вкратце, для внутриклеточного окрашивания спленоциты культивировали в присутствии 20 нг / мл форболниристата ацетата, 1 мМ иономицина и 4 мМ монензина (все от Sigma) в течение 6 часов. Клетки окрашивали конъюгированными с FITC антителами против CD4 мыши (BD Biosciences) и конъюгированными с аллофикоцианином антителами против IFN-g мыши (XMG1.2) или IL-4 (11B11) (BD Biosciences), как описано ранее (9, 53).Клетки окрашивали на Treg-клетки с использованием набора для окрашивания Mouse Regulatory T-cell Staining Kit (eBioscience) в соответствии с инструкциями производителя. Созревание BMDC определяли по уровням активации CD11c ⁺ и CD80 ⁺ , как описано ранее (48). Уровни IL-1β, IFN-γ, IL-12p70, TNF-α, IL-6, MCP-1 и IL-10 в сыворотке определяли с использованием набора для лечения воспаления у мышей (BD Biosciences) в соответствии с протоколом производителя. . Для этих экспериментов использовали проточный цитометр (FACSCalibur, BD Biosciences), как описано ранее (9, 54).

ELISA и анализ активности ферментов

Уровни IL-1β, IL-17A и INF-γ в супернатанте культивируемых клеток измеряли с использованием коммерческих наборов ELISA (R&D Systems, MN, USA), в то время как активность каспазы-1 измеряли с помощью флуорометрического анализа каспазы-1. комплект (системы R&D) согласно инструкциям производителя. Уровни антител против дцДНК в сыворотке определяли с помощью набора для ELISA против дцДНК мыши (Alpha Diagnostic, США) в соответствии с инструкциями производителя.

Определение уровней АФК

Для почечных тканей, сывороток, BMDC и подоцитов использовали три различных метода. Производство супероксид-аниона in situ определяли в тканях почек с помощью мечения дигидроэтидием (DHE; Sigma) и количественно оценивали, как описано ранее (9, 53). Уровни АФК в сыворотке и тканях почек измеряли с помощью люцигенин-усиленного хемилюминесцентного анализа, как описано ранее (8, 9). Производство внутриклеточных ROS в BMDC и подоцитах измеряли путем определения интенсивности флуоресценции 2 ‘, 7’-дихлорфлуоресцеина диацетата (Invitrogen), как описано ранее (52).N-ацетил-L-цистеин (NAC) является поглотителем ROS, и его использовали в качестве положительного контроля для оценки ингибирующего действия M1 на продукцию ROS в BMDC и подоцитах.

Анализ ПЦР в реальном времени

РНК

экстрагировали с помощью REzol (Protech Technology, Тайбэй, Тайвань), а набор реагентов SYBR Green RT-PCR Reagents Kit (Applied Biosystems, Массачусетс, США) использовали, как описано ранее (9, 55). Пары праймеров ПЦР, использованные для анализа, были следующими: мышиный IL-1β, прямой: 5′-CCAGGATGAGGACATGAGCACC-3 ‘и обратный: 5′-TTCTCTGCAGACTCAAACTCCAC-3′; мышиный IL-18 вперед: 5’-ACTGTACAACCGGAGTAATACGG-3 ‘и 5′-TCCATCTTGTTGTGTCCTGG-3′; GAPDH мыши: прямой: 5’-TCCGCCCCTTCTGCCGATG-3 ‘и обратный: 5′-CACGGAAGGCCATGCCAGTGA-3′; T-ставка мыши вперед: 5’-TCCCATTCCTGTCCTTCA-3 ‘и обратно: 5′-GCTGCCTTCTGCCTTTC-3′; GATA-3 мыши вперед: 5’-ACCACGGGAGCCAGGTATG-3 ‘и назад: 5′-CGGAGGGTAAACGGACAGAG-3’.

Статистический анализ

Данные представлены в виде средних значений ± стандартная ошибка среднего и были проанализированы с использованием однофакторного дисперсионного анализа и последующего теста Шеффе. Значение p- <0,05 считалось статистически значимым для каждого из экспериментов.

Результаты

M1 Улучшение почечных заболеваний и снижение сывороточных уровней аутоантител против дцДНК

У

мышей ASLN, получавших носитель (ASLN + носитель), развивалась аномальная функция почек, что было продемонстрировано повышенными уровнями мочевины и Cr в сыворотке как на 3-й, так и на 5-й неделе после индукции заболевания по сравнению с нормальными контрольными мышами (Фигуры 1A, B).Напротив, этот эффект значительно подавлялся у мышей ASLN (ASLN + M1), получавших M1, на 5-й неделе, хотя на 3-й неделе не было обнаруживаемой разницы в уровнях почечной функции между мышами ASLN + носитель и ASLN + M1 (рисунки 1А, Б). Как показано на фиг. 1C, мыши ASLN + носитель показали альбуминурию, о чем свидетельствует повышенное соотношение альбумин в моче / Cr на 3-й и 5-й неделе по сравнению с нормальными контрольными мышами. Однако у мышей ASLN + M1 уровень альбуминурии значительно снизился. Аналогичным образом, значительно сниженные уровни сывороточных аутоантител против dsDNA наблюдались у мышей ASLN + M1 по сравнению с таковыми у мышей ASLN + носитель как на 3-й, так и на 5-й неделе (фиг. 1D).По данным световой микроскопии, в начале 3-й недели у мышей ASLN + носитель начали развиваться значительная клубочковая пролиферация и интерстициальное воспаление (Рисунки 1E – J). На 5-й неделе у мышей ASLN + носитель выявили характерные тяжелые поражения, включая внутреннюю пролиферацию клеток, клеточное серповидное образование, инфильтрацию нейтрофилов и склероз в клубочках, а также интерстициальное воспаление, которое характеризовалось инфильтрацией перигломерулярных мононуклеарных лейкоцитов (рисунки 1E – J). . Напротив, мыши ASLN + M1 показали значительно улучшенное поражение почек на 3-й неделе, а на 5-й неделе у мышей была идентифицирована только очаговая мезангиальная пролиферация и легкое интерстициальное воспаление (Рисунки 1E – J).Как показано на Фигуре 1K, хотя у мышей ASLN + носитель наблюдались значительно более высокие показатели активности гломерулонефрита по сравнению с мышами нормального контроля, этот эффект подавлялся у мышей ASLN + M1 как на 3-й, так и на 5-й неделе. у мышей обнаружена глубокая инфильтрация CD3 ⁺ Т-клеток (дополнительные рисунки 1A, B), моноцитов / макрофагов F4 / 80 ⁺ (дополнительные рисунки 1C, D) и DC CD11c ⁺ (дополнительные рисунки 1E, F) в клубочки и почечные интерстициальные ткани на 3-й и 5-й неделе.Однако эти эффекты инфильтрации мононуклеарных лейкоцитов в почках значительно подавлялись у мышей ASLN + M1 (дополнительные рисунки 1A – F).

Рисунок 1 . Функция почек, альбуминурия, патология почек и антитела против дцДНК. (A) Уровни мочевины сыворотки и (B) сыворотки Cr. (C) Изучение динамики уровней альбуминурии. (D) Уровни сывороточных аутоантител к дцДНК. (E) Окрашивание H&E. Стрелки указывают на инфильтрацию мононуклеарных лейкоцитов.Оригинальное увеличение х400. (F – J) Подсчет очков H&E. (K) Оценка активности гломерулонефрита. Данные представляют собой средние значения ± стандартная ошибка среднего для 8 мышей на группу. ASLN, ускоренный и тяжелый волчаночный нефрит. АМК, азот мочевины крови. Cr, креатинин. ^* p <0,05, ^** p <0,01, ^*** p <0,005, и ^**** p <0,001. # Не обнаруживается. нс, существенной разницы нет.

M1 Снижение уровня цитокинов в сыворотке

Было показано, что

M1 обладает противовоспалительной активностью, и на моделях артрита на крысах и макрофагах мышей (45, 50) мы затем измерили сывороточные уровни цитокинов у мышей.Как показано на фиг. 2A – C, значительно повышенные уровни IL-1β, IFN-γ и IL-6 в сыворотке наблюдались у мышей ASLN + носитель по сравнению с таковыми у нормальных контрольных мышей как на 3-й, так и на 5-й неделе, но эти эффекты значительно подавлялись у мышей ASLN + M1. Кроме того, сывороточные уровни TNF-α, MCP-1 и IL-12p70 были увеличены у мышей ASLN + носитель на 5 неделе, но значительно сниженные сывороточные уровни этих цитокинов наблюдались у мышей ASLN + M1 (рисунки 2D– F). Более того, мыши ASLN + M1 продуцировали значительно более высокие уровни ИЛ-10, чем мыши ASLN + носитель на 5-й неделе, хотя не было разницы в уровнях этого цитокина в сыворотке крови в начале 3-й недели (фиг. 2G).

Рисунок 2 . Экспрессия воспалительных цитокинов в сыворотке крови. Уровни сыворотки (A) IL-1β, (B) IFN-γ, (C) IL-6, (D) TNF-α, (E) MCP-1 (F ) IL-12 p70 и (G) IL-10. Горизонтальная пунктирная линия указывает среднее значение уровней от нормальных контрольных мышей. Данные представляют собой средние значения ± стандартная ошибка среднего для 8 мышей на группу. ASLN, ускоренный и тяжелый волчаночный нефрит. ^** p <0,01, ^*** p <0.005 и ^**** p <0,001. нс, существенной разницы нет.

Дифференциально регулируемая активация Th-клеток M1 и дифференцировка Treg-клеток

Дисфункция подмножеств Th очень важна для развития LN (4, 42, 43). Кроме того, было показано, что клетки Th и Treg вовлекают активные LN у пациентов (4, 43). Затем мы исследовали влияние M1 на активацию Th-клеток и дифференцировку Treg-клеток. Как продемонстрировал анализ поглощения тимидина в спленоцитах, значительно увеличенная пролиферация Т-клеток наблюдалась у мышей ASLN + носитель по сравнению с нормальными контрольными мышами как на 3-й, так и на 5-й неделе (фиг. 3A).Однако обработка M1 значительно снизила пролиферацию Т-клеток до уровней, которые наблюдались у нормальных контрольных мышей на 5-й неделе (фиг. 3A). Более того, общее количество клеток CD3 ⁺ CD69 ⁺ клеток и CD4 ⁺ CD69 ⁺ клеток в спленоцитах мышей ASLN + M1 было значительно снижено по сравнению с таковыми у мышей ASLN + носитель на обеих неделях. 3 и 5 неделя (рисунки 3B, C). Для дальнейшей идентификации смещения Th анализ с внутриклеточным окрашиванием показал, что общее количество клеток Th-клеток (клетки CD4 ⁺ ), которые экспрессировали IFN-γ или IL-4, значительно увеличилось в спленоцитах ASLN + носитель, и этот эффект подавлялся у мышей ASLN + M1 на 3-й неделе (рисунки 3D, E).Кроме того, значительно увеличенное общее количество клеток CD4 ⁺ CD25 ⁺ Foxp3 ⁺ Treg-клеток было замечено у мышей ASLN + M1 на 5-й неделе по сравнению с таковыми у мышей ASLN + носитель, хотя не было различий в общее количество клеток Treg среди трех групп мышей на 3 неделе (рис. 3F).

Рисунок 3 . Функция Т-лимфоцитов. (A) Пролиферация Т-клеток в спленоцитах по анализу поглощения тимидина. (B) CD3 ⁺ CD69 ⁺ Т-клетки; (C) CD4 ⁺ CD69 ⁺ Т-клетки; (D) CD4 ⁺ IFNγ ⁺ Т-клетки; (E) CD4 ⁺ IL-4 ⁺ Т-клетки; (F) CD4 ⁺ CD25 ⁺ Foxp3 ⁺ Treg-клетки, в спленоцитах, методом проточной цитометрии.Данные представляют собой средние значения ± стандартная ошибка среднего для 8 мышей на группу. ASLN, ускоренный и тяжелый волчаночный нефрит. ^* p <0,05, ^** p <0,01, ^*** p <0,005, и ^**** p <0,001. нс, существенной разницы нет.

Ингибирование продукции M1 ROS и активация инфламмасомы NLRP3

Продукция ROS в BMDC, подоцитах и ​​почечных тканях

Избыточная продукция АФК способствует активации инфламмасомы NLRP3 (21, 22).ДК представляют антигены и первичные Т-клеточные ответы при различных воспалительных состояниях и играют решающую роль в эволюции ЛУ (4, 43). Сначала оценивали влияние M1 на продукцию ROS в BMDC и подоцитах. Как показано на фиг. 4A, B, M1 снижает ATP-опосредованную продукцию ROS в LPS-примированных и ATP-активированных BMDC и подоцитах, соответственно, и это открытие предполагает, что соединение ингибировало активацию инфламмасомы NLRP3 в этих клетках. Более того, M1 значительно снижал уровни белка p47 ^phox и COX-2 дозозависимым образом в LPS-примированных BMDC (Фигуры 4C, D) и подоцитах (Фигуры 4E, F), соответственно.

Рисунок 4 . Производство АФК. (A) Уровни АФК в BMDC. Клетки инкубировали с M1 (10 мкМ) или NAC (10 мМ; поглотитель ROS) в течение 30 минут, затем обрабатывали 100 нг / мл LPS или без него в течение 5,5 часов и АТФ (5 мМ). (B) Уровни АФК в подоцитах. Клетки инкубировали с M1 (10 мкМ) или NAC (10 мМ; поглотитель ROS) в течение 30 минут, затем обрабатывали 1 мкг / мл LPS или без него в течение 5,5 часов и АТФ (5 мМ). Продукцию ROS измеряли с помощью диацетата 2 ‘, 7’ -дихлорфлуоресцеина после инкубирования с АТФ. (C) НАДФН-оксидаза p47 ^phox (p47 ^phox ) и уровни белка COX-2 в BMDC по данным вестерн-блоттинга и полуколичественного анализа (D) . BMDC инкубировали с M1 (10 мкМ) в течение 30 минут, затем обрабатывали 100 нг / мл LPS или без него в течение 6 часов. (E) НАДФН-оксидаза p47 ^phox (p47 ^phox ) и уровни белка COX-2 в подоцитах по данным вестерн-блоттинга и полуколичественного анализа (F) . Подоциты инкубировали с M1 (10 мкМ) в течение 30 мин, затем обрабатывали 1 мкг / мл LPS или без него в течение 6 часов.Данные выражены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего для трех отдельных экспериментов, и каждый эксперимент проводили в трех повторностях. (G) Производство почечных АФК in situ с окрашиванием DHE и оценкой (H) . Исходное увеличение, 400 ×. Уровни АФК в (I), почечных тканях и (J), в сыворотке. Данные представляют собой средние значения ± стандартная ошибка среднего для 8 мышей на группу. ASLN, ускоренный и тяжелый волчаночный нефрит. BMDC, дендритные клетки костного мозга. NAC, N-ацетил-L-цистеин.G, клубочки. ДГЭ, дигидроэтидий. ^** p <0,01, ^*** p <0,005 и ^**** p <0,001. нс, существенной разницы нет.

Далее, по сравнению с нормальными контрольными мышами, хотя уровни флуоресценции DHE, обнаруженные с помощью анализа in situ , были значительно повышены в клубочках и некоторых почечных канальцах у мышей ASLN + носитель, на 3–5 неделе этот эффект был значительно ингибируется у мышей ASLN + M1 (Рисунки 4G, H).Параллельно с этим уровни ROS в почках мышей ASLN + носитель были значительно увеличены по сравнению с уровнями нормальных контрольных мышей на 3-й неделе и продолжали расти до 5-й недели, но M1 значительно снизил уровни ROS на 5-й неделе в ASLN +. Мыши M1 (рис. 4I). Кроме того, M1 значительно снижал уровни ROS в сыворотке мышей ASLN + M1 по сравнению с уровнями мышей ASLN + носитель как на 3-й, так и на 5-й неделе, хотя эти уровни были выше, чем у нормальных контрольных мышей на 5-й неделе (фиг. 4J).

Активация инфламмасомы NLRP3 в BMDC, подоцитах, макрофагах и почечных тканях

Как показано на фиг. 5, при обработке M1 LPS-примированные BMDC имели сниженную АТФ-опосредованную секрецию IL-1β (фиг. 5A) и активацию каспазы-1 (фиг. 5B) в зависимости от дозы.Кроме того, M1 значительно снижал уровни экспрессии NLRP3 и proIL-1β в LPS-примированных BMDC (Фигуры 5C, D). Кроме того, M1 значительно ингибировал уровни экспрессии p-IκB в LPS-примированных BMDC в зависимости от времени (Фигуры 5E, F).

Рисунок 5 . Активация инфламмасом NLRP3. (A – F) БМДК. (G – L) Подоциты. (M) Мышиные макрофаги J774A.1. BMDC инкубировали с указанными концентрациями M1 в течение 30 минут, а затем инкубировали с 100 нг / мл LPS в течение 5.5 ч и 5 мМ АТФ в течение 30 мин. (A) Секрецию IL-1β в BMDC измеряли с помощью ELISA, а (B) pro-caspase-1 (procasp-1) и секрецию каспазы-1 (Casp-1) в супернатанте BMDC измеряли с помощью Вестерн-блоттинг. (C, D) уровней белка NLRP3 и proIL-1β и (E, F) уровней белка p-IκB в BMDC по данным вестерн-блоттинга после инкубирования с M1 в течение 30 минут, а затем инкубирования со 100 нг / мл LPS в течение 6 ч или в указанное время. Секрецию (G) IL-1β и активность каспазы-1 (H) в подоцитах измеряли с помощью ELISA после инкубирования с указанными концентрациями M1 в течение 30 минут, а затем инкубировали со 100 нг / мл LPS в течение 5.5 ч и 5 мМ АТФ в течение 30 мин. (I, J) Уровни белка NLRP3 и proIL-1β и (K, L) p-IκB в подоцитах по данным вестерн-блоттинга после инкубирования с M1 в течение 30 минут, а затем инкубирования с 1 мкг / мл LPS в течение 6 часов. или в указанное время. (M) Секрецию IL-1β в макрофагах J774A.1 измеряли с помощью ELISA. Макрофаги инкубировали с указанными концентрациями M1 в течение 30 минут, а затем инкубировали с 1 мкг / мл LPS в течение 5,5 часов и 5 мМ АТФ в течение 30 минут. Данные выражены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего для трех отдельных экспериментов, и каждый эксперимент проводили в трех повторностях. (N) Уровни мРНК IL-1β и IL-18 в почках по данным количественной ПЦР. (O) Почечная экспрессия NLRP3, IL-1β и каспазы-1 (Casp-1) вестерн-блоттингом и полуколичественным анализом (P) . Горизонтальная пунктирная линия указывает среднее значение уровней от нормальных контрольных мышей. Данные представляют собой средние значения ± стандартная ошибка среднего для 8 мышей на группу. Горизонтальная пунктирная линия указывает среднее значение уровней от нормальных контрольных мышей. BMDC, дендритные клетки костного мозга. ASLN, ускоренный и тяжелый волчаночный нефрит. ^* p <0,05, ^** p <0,01, ^*** p <0,005, и ^**** p <0,001. # Не обнаруживается. нс, существенной разницы нет.

Активация инфламмасом NLRP3 в подоцитах (20) или макрофагах (8, 17, 56) также способствует прогрессированию заболевания LN. АТФ-опосредованная секреция IL-1β (фиг. 5G) и активация каспазы-1 (фиг. 5H), вероятно, были снижены M1 в LPS-примированных подоцитах мыши дозозависимым образом.Опять же, M1 подавлял экспрессию NLRP3 и proIL-1β в подоцитах, примированных LPS (Фигуры 5I, J). Как показано на фиг. 5K, L, обработка M1 также значительно ингибировала уровни белка p-IκB в LPS-примированных подоцитах в зависимости от времени. Ингибирующее действие M1 на инфламмасому NLRP3 было также протестировано с использованием линии клеток макрофагов мыши J774A.1, поскольку M1 может ингибировать АТФ-опосредованную секрецию IL-1β в макрофагах, примированных LPS (фиг. 5M). В совокупности эти данные предполагают, что соединение ингибирует как прайминг, так и активирующие сигналы инфламмасомы NLRP3 в этих клетках.

Хотя уровни мРНК IL-1β и IL-18 (фигура 5N) и уровни экспрессии белков NLRP3, IL-1β и каспазы-1 (фигуры 50, P) были значительно увеличены в почечных тканях мышей ASLN + носитель по сравнению с У нормальных контрольных мышей эти эффекты ингибировались у мышей ASLN + M1 как на 3-й, так и на 5-й неделе.

M1 ингибирует инфламмасому NLRP3 посредством индукции аутофагии в BMDC и подоцитах

Затем мы исследовали, участвует ли аутофагия в защитном эффекте M1 в BMDC и подоцитах.BMDC или подоциты инкубировали с M1 в зависимости от времени. Как показано на Рисунке 6, M1 усиливает аутофагию в BMDC (Рисунки 6A, B) и подоцитах (Рисунки 6C, D), о чем свидетельствует увеличение соотношений LC3B-II / LC3B-I и уровней Atg5, что указывает на усиление аутофагический ответ в этих клетках на обработку M1. Кроме того, SIRT3 также участвует в процессе индукции аутофагии (31, 57) и может ингибировать продукцию IL-1β за счет снижения продукции про-IL-1β и ROS (31, 32). Как показано на Фигуре 6, обработка M1 увеличивала уровни экспрессии SIRT3 как в BMDC (Фигуры 6A, B), так и в подоцитах (Фигуры 6C, D).Кроме того, обработка M1 значительно увеличивала экспрессию LC3B, что показано в увеличении образования точек в обработанных M1 BMDC (фигура 6E) и подоцитах (фигура 6F), соответственно. Чтобы проверить, связано ли ингибирующее действие M1 на инфламмасому NLRP3 с индукцией аутофагии. Мы обнаружили, что 3-MA, ингибитор аутофагии, обращает ингибирующий эффект M1 на активацию каспазы-1 и секрецию IL-1β (фиг. 6G) в LPS-примированных и ATP-активированных BMDC. Кроме того, 3-MA также обращал ингибирующий эффект M1 на секрецию IL-1β в LPS-примированных и ATP-активированных подоцитах (фиг. 6H).Эти результаты предполагают, что M1 подавляет активацию инфламмасомы NLRP3 в BMDC и подоцитах путем усиления индукции аутофагии.

Рисунок 6 . M1 ингибировал воспаление NLRP3 посредством индукции аутофагии и регулировал адаптивный иммунитет. (A, B, E, G, I – K) BMDC. (C, D, F, H) Подоциты. Уровни экспрессии белков LC3B, Atg5 и SIRT3 по данным вестерн-блоттинга после инкубации в течение 0–24 ч с указанными концентрациями M1 в подоцитах (A, B), BMDC и (C, D), подоцитов.Экспрессия LC3B с помощью иммунофлуоресцентного окрашивания в подоцитах (E), BMDC и (F), подоцитов. Обе клетки инкубировали с M1 (10 мкМ) или носителем (ДМСО; 0,2%) в течение 6 часов. Стрелка указывает на положительное окрашивание. (G) Уровни экспрессии белка каспазы-1 (Casp-1) и IL-1β в супернатанте BMDC по данным вестерн-блоттинга и (H) секреция IL-1β в подоцитах с помощью ELISA после инкубирования с 5 мМ 3 -MA (ингибитор аутофагии) в течение 30 минут, затем с 10 мкМ M1 в течение 30 минут, затем 100 нг / мл (BMDC) или 1 мкг / мл (подоциты) LPS в течение 5.5 ч и 5 мМ АТФ в течение 30 мин. (I) Уровни экспрессии CD80 ⁺ (в закрытых клетках CD11c ⁺ ), определенные с помощью проточной цитометрии в BMDC от самок мышей NZB / WF1 в возрасте 8 недель, которых инкубировали с M1 (10 мкМ) 30 мин. , затем 100 нг / мл ЛПС в течение 24 ч и 5 мМ АТФ в течение 30 мин. (J) OT-II антиген-специфическую пролиферацию Т-клеток измеряли по включению ³ H-тимидина. Использовали соотношение общего количества клеток для BMDC и CD4 ⁺ Т-клеток в 1: 2.BMDC инкубировали с M1 (1, 3 или 10 мкМ) 30 мин и LPS (100 нг / мл) в течение 24 ч, собранные супернатанты совместно культивировали с OT-II CD4 ⁺ Т-клетки, обработанные OVA _323-339 (1 мкг / мл) для дальнейшей 24-часовой инкубации, затем добавляли [ ³ H] тимидин для обнаружения пролиферации β-счетчиками. Продукцию (K) IL-17A и продукцию (L) IFN-γ анализировали с помощью ELISA. Соотношения общего числа клеток для BMDC и CD4 ⁺ Т-клеток в 1: 2 для IL-17A и в 1: 8 для IFN-γ были приняты соответственно.BMDC инкубировали с M1 (10 мкМ) 30 мин и LPS (100 нг / мл) в течение 24 ч, собранные супернатанты совместно культивировали с OT-II CD4 ⁺ Т-клетками, обработанными пептидом OVA _323-339 (1 мкг / мл) для последующих 3 дней инкубации. Для анализа этих белков собирали супернатанты. (M, N) уровни мРНК T-bet и GATA-3 измеряли с помощью анализа qPCR. BMDC инкубировали с M1 (10 мкМ) 30 мин и LPS (100 нг / мл) в течение 24 ч, собранные супернатанты совместно культивировали с OT-II CD4 ⁺ Т-клетками, обработанными пептидом OVA _323-339 (1 мкг / мл) для последующих 3 дней инкубации.Клетки собирали для выделения РНК и анализа количественной ПЦР. Данные выражены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего для трех отдельных экспериментов, и каждый эксперимент проводили в трех повторностях. BMDC, дендритные клетки костного мозга; 3-МА, 3-метиладенин, ингибитор аутофагии. MFI, средняя интенсивность флуоресценции. ^* p <0,05, ^** p <0,01, ^*** p <0,005, и ^**** p <0,001. нс, существенной разницы нет.

M1-модулированная BMDC-опосредованная антиген-специфическая пролиферация и активация Т-клеток

Ввиду того, что M1 ингибирует активацию инфламмасомы NLRP3 в BMDC (фиг. 5) и регулирует функцию T-клеток in vivo (фиг. 3), затем мы исследовали влияние M1 на активацию BMDC и результирующие ответы T-клеток. Как показано на фиг. 6I, значительно сниженное процентное содержание CD11c ⁺ CD80 ⁺ DC наблюдалось в M1-обработанных LPS-примированных BMDC. Более того, анализ OVA-антиген-специфической пролиферации Т-клеток показал, что примированные LPS BMDC демонстрируют повышенную пролиферацию CD4 ⁺ Т-клеток, и этот эффект значительно подавляется обработкой M1 (фиг. 6J).Кроме того, M1 уменьшал продукцию IL-17A (фиг. 6K) и IFN-γ (фиг. 6L) активированными Т-клетками. M1 значительно ингибировал уровни мРНК T-bet (фиг. 6M) и GATA3 (фиг. 6N) в активированных Т-клетках, которые были совместно инкубированы с обработанными M1 LPS-примированными BMDC. В совокупности эти результаты предполагают, что M1 отменяет способность клеток индуцировать антиген-специфическую пролиферацию и активацию Т-клеток.

Почечные сигнальные пути, связанные с активацией инфламмасомы NLRP3 с пониженной регуляцией

Всего с помощью протеомного анализа на основе iTRAQ было идентифицировано 3816 белков в почечных тканях нормального контроля, мышей ASLN + носитель и ASLN + M1.Для систематического понимания эффектов M1 на мышей ASLN был использован анализ обогащения набора генов для оценки биологически обогащенных путей / сетей при сравнении мышей ASLN + M1 с мышами ASLN + носитель. Данные показали, что путь системной красной волчанки был значительно подавлен, и предполагают, что несколько сигнальных путей, связанных с активацией инфламмасомы NLRP3 на MAPK, взаимодействием ECM-рецептора, молекулами клеточной адгезии, Toll-подобным рецептором, FcγR-опосредованным фагоцитозом и трансэндотелиальной миграцией лейкоцитов могут все они вносят вклад в механизм действия потенциальных ренопротекторных эффектов M1 у обработанных мышей ASLN (дополнительная таблица S1).

Обсуждение

Хорошо известно, что китайские лечебные травы, используемые в комбинации, долгое время считались мягкими лекарствами с «интегрированным действием». Тем не менее, мы впервые продемонстрировали, что M1 проявляет свои драматические терапевтические эффекты у мышей ASLN, характеризующихся острым нарушением функции почек, тяжелой протеинурией, высокими уровнями анти-дцДНК в сыворотке и диффузными пролиферативными поражениями почек высокой степени злокачественности. Мы показали, что эти полезные эффекты M1 четко коррелируют со следующим: [1] ингибирование инфламмасомы NLRP3, связанное с индукцией аутофагии в почечных тканях, BMDC или подоцитах, [2] модуляция активации Th-клеток и [3] индукция дифференцировки Treg-клеток. в ASLN (рисунок 7).

Рисунок 7 . Схематическое изображение вероятного механизма действия терапевтических эффектов M1 на ASLN. ASLN, ускоренный и тяжелый волчаночный нефрит.

Инфламмасома NLRP3 имеет широкое применение при различных заболеваниях почек из-за ее связи с иммунитетом, провоспалительными цитокинами и аутофагией (58). Ранее мы показали, что ингибирование активации инфламмасомы NLRP3 за счет снижения продукции ROS и активации NF-κB значительно улучшает повреждение почек на модели ASLN у мышей (8).В настоящем исследовании мы обнаружили, что M1 ингибирует экспрессию белка p-IκB в BMDC и подоцитах, которые были примированы LPS, предполагая, что одним из основных эффектов M1 может быть ингибирование продукции про-IL-1β за счет его подавления. активации NF-κB. Мы также продемонстрировали, что M1 способен снижать уровни белка p47 ^phox и COX-2 дозозависимым образом в обоих LPS-примированных клетках. Кроме того, мы показали, что снижение продукции ROS наблюдалось в сыворотке и почках у мышей ASLN + M1, а также в BMDC и подоцитах, обработанных M1.В соответствии с нашими выводами, Chen et al. продемонстрировали, что M1 ингибирует созревание IL-1β и снижает активацию инфламмасомы NLRP3 в жировой ткани, обработанной высоким содержанием глюкозы (56), и многие отчеты показали, что основные функциональные компоненты гинсенозида обладают антиоксидантными свойствами (47, 50). Вместе мы делаем вывод, что снижение генерации ROS с помощью M1 может объяснить результирующее снижение активации воспаления NLRP3.

Кроме того, мы обнаружили, что значительно увеличили аутофагические ответы в BMDC мышей, обработанных M1.Было показано, что аутофагия влияет на секрецию IL-1β в макрофагах (30, 31) и контролирует продукцию IL-1β путем разрушения про-IL-1β (30, 32), чтобы ингибировать активацию инфламмасомы NLRP3, и этот процесс также может отрицательно регулировать врожденный иммунный ответ и воспаление (23, 33). В настоящем исследовании мы продемонстрировали, что 3-MA, ингибитор аутофагии, обращает ингибирующий эффект M1 на активацию инфламмасомы NLRP3 в BMDC мыши, предполагая, что M1 подавляет активацию инфламмасомы NLRP3 посредством индукции аутофагии, что является потенциальным механизмом действия. для чистого соединения в ASLN.Хотя клетки, обработанные как M1 + LPS, так и LPS, показали повышенные уровни белка LC3B, не было существенной разницы в уровнях экспрессии белка (данные не показаны). Возможное объяснение этого эффекта может заключаться в том, что сам ЛПС может вызывать активацию аутофагии в различных клетках, включая иммунные и соматические клетки (59, 60).

В настоящем исследовании мы продемонстрировали, что обработка M1 значительно ингибировала активацию инфламмасомы NLRP3 в BMDC мышей ASLN + M1.Мы также продемонстрировали, что введение M1 значительно ингибировало инфильтрацию мононуклеарных лейкоцитов, включая DC, макрофаги и Т-клетки, в почки мышей ASLN + M1. Здесь мы обнаружили, что введение M1 значительно снижает созревание BMDC и ингибирует пролиферацию и дифференцировку индуцированных ими антиген-специфических CD4 ⁺ Т-клеток с помощью BMDC. Эти данные свидетельствуют о том, что M1 регулирует адаптивный иммунный ответ, опосредованный функциями Т-клеток через DC.Следует отметить, что хотя некоторые измерения были статистически значимыми, биологические последствия таких различий могут нуждаться в дальнейшем изучении, в том числе почему минимальное влияние M1 на секрецию IL-1β в BMDC (рис. 5A) и снижение процента активированных Т-клеток (CD69 ⁺ Т-клеток) спленоцитов у мышей ASLN + M1 (Фигуры 3B, C). Кроме того, IL-10 является важным медиатором подавления Treg-клеток, а продукция IL-10 Treg-клетками играет ключевую противовоспалительную роль (61).Индукция Treg-клеток, секретирующих IL-10, путем лечения анти-CD3 антителами в модели, подверженной волчанке, у мышей может подавлять активацию эффекторных Т-клеток (Th2, Th3 и Th27), тем самым улучшая состояние почек у мышей (62). В настоящем исследовании мы продемонстрировали, что обработка M1 значительно ингибировала пролиферацию и активацию Т-клеток и увеличивала долю Treg-клеток и продукцию IL-10 у мышей ASLN. Эти комбинированные эффекты M1, которые одновременно ингибируют активацию T-клеток, но способствуют активности Treg-клеток, могут иметь решающее значение с точки зрения механизма действия M1 для оказания его терапевтического эффекта на эту мышиную модель ASLN.Кроме того, кинетика Th2 (IFNγ ⁺ ) или Th3 (IL-4 ⁺ ) и Treg (CD25 ⁺ Foxp3 ⁺ ) различна, что может затруднить объяснение фенотипа in vivo . , и для решения этой проблемы необходимо дополнительное исследование.

Активация инфламмасомы NLRP3 участвует в патогенезе повреждений подоцитов и развитии протеинурии у пациентов с ЛУ (20). В настоящем исследовании мы показали, что обработка M1 значительно ингибировала активацию инфламмасомы NLRP3 в подоцитах за счет индукции аутофагии.Взятые вместе, эти результаты предполагают, что M1 защищал повреждение подоцитов у мышей с ASLN за счет усиления аутофагии, таким образом защищая от активации воспаления NLRP3.

В заключение, лечение M1 значительно улучшило состояние мышей ASLN за счет ингибирования активации инфламмасомы NLRP3 в сочетании с индукцией аутофагии и дифференциальной регуляцией функций Т-клеток, и результаты подтверждают, что M1 является новым терапевтическим кандидатом для пациентов с LN со статусом резкой трансформации нижних конечностей. — нефрит от степени (умеренный мезангиальный) до нефрита более высокой степени (диффузный пролиферативный).

Доступность данных

Все наборы данных, созданные для этого исследования, включены в рукопись и дополнительные файлы.

Авторские взносы

Все авторы участвовали в написании статьи или ее критическом пересмотре с точки зрения важного интеллектуального содержания, и все авторы одобрили окончательную версию для публикации. S-MK и F-CL имели полный доступ ко всем данным в исследовании и несли ответственность за целостность данных и точность анализа данных.

Финансирование

Эта работа была поддержана грантами TSGH-C108-085 от больницы общего профиля Tri-Service Медицинского центра национальной обороны; МОСТ 108-2320-В-016-014 от Министерства науки и технологий; MAB-107-042 из Управления по делам национальной обороны и медицины, Медицинский центр национальной обороны, Тайбэй, Тайвань.

Заявление о конфликте интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Дополнительные материалы

Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fimmu.2019.01951/full#supplementary-material

Дополнительная фигура 1. Почечная инфильтрация CD3 ⁺ Т-клеток, F4 / 80 ⁺ макрофагов и дендритных клеток CD11c ⁺ . (A, B) CD3 ⁺ Т-клетки, (C, D) F4 / 80 ⁺ макрофаги и (E, F) CD11c ⁺ дендритные клетки по данным иммуногистохимии и количественного анализа.Стрелка указывает на инфильтрацию дендритных клеток CD3 ⁺ , макрофаги F4 / 80 ⁺ или CD11c ⁺ . Исходное увеличение, 400 ×. Данные представляют собой средние значения ± стандартная ошибка среднего для 8 мышей на группу. ASLN, ускоренный и тяжелый волчаночный нефрит. ^* p <0,05, ^** p <0,01 и ^*** p <0,005. # Не обнаруживается.

Список литературы

1. Венинг Дж. Дж., Д’Агати В. Д., Шварц М. М., Сешан С. В., Альперс С. Е., Аппель Г. Б. и др.Пересмотр классификации гломерулонефрита при системной красной волчанке. Дж. Ам Соц Нефрол . (2004) 15: 241–50. DOI: 10.1097 / 01.ASN.0000108969.21691.5D

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

2. Там Л.С., Ли Е.К., Лай Ф.М., Чан Ю.К., Сзето CC. Мезангиальный волчаночный нефрит у китайцев связан с высокой скоростью трансформации в нефрит более высокой степени. Волчанка . (2003) 12: 665–71. DOI: 10.1191 / 0961203303lu446oa

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

3.Миттал Б., Гурвиц С., Реннке Х., Сингх А.К. Новые подкатегории волчаночного нефрита IV класса: есть ли различия в клинических, гистологических и исходах? Am J Kidney Dis. (2004) 44: 1050–9. DOI: 10.1053 / j.ajkd.2004.08.027

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

4. Туччи М., Стуччи С., Стрипполи С., Сильвестрис Ф. Избыточная продукция цитокинов, активация Т-клеток и дефектные Т-регуляторные функции способствуют развитию нефрита при системной красной волчанке. Дж. Биомед Биотехнология .(2010) 2010: 457146. DOI: 10.1155 / 2010/457146

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

5. Хаас К.М., Ватанабэ Р., Мацусита Т., Накашима Х., Ишиура Н., Окочи Х. и др. Защитные и патогенные роли В-клеток во время системного аутоиммунитета у мышей NZB / W F1. Дж. Иммунол . (2010) 184: 4789–800. DOI: 10.4049 / jimmunol.01

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

7. Casciola-Rosen LA, Anhalt G, Rosen A.Аутоантигены, нацеленные на системную красную волчанку, сгруппированы в двух популяциях поверхностных структур на апоптотических кератиноцитах. J Exp Med. (1994) 179: 1317–30. DOI: 10.1084 / jem.179.4.1317

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

8. Ka SM, Lin JC, Lin TJ, Liu FC, Chao LK, Ho CL, et al. Цитраль смягчает модель ускоренного и тяжелого волчаночного нефрита, подавляя сигнал активации инфламмасомы NLRP3 и усиливая активацию Nrf2. Arthritis Res Ther . (2015) 17: 331. DOI: 10.1186 / s13075-015-0844-6

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

9. Цай П. Я., Ка С. М., Чанг Дж. М., Лай Дж. Х., Дай М. С., Дженг Х. Л. и др. Антрохинонол дифференциально модулирует активность Т-клеток и снижает продукцию интерлейкина-18, но усиливает активацию Nrf2 при тяжелом волчаночном нефрите, ускоренном у мышей. Arthritis Rheum . (2012) 64: 232–42. DOI: 10.1002 / art.33328

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

10.Цай П. Я., Ка С. М., Чанг Дж. М., Чанг В. Л., Хуанг Ю. Дж., Хунг Л. М. и др. Терапевтический потенциал DCB-SLE1, экстракта смеси китайских лекарственных трав, при тяжелом волчаночном нефрите. Am J Physiol Renal Physiol . (2011) 301: F751–64. DOI: 10.1152 / ajprenal.00706.2010

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

11. Цай П. Я., Ка С. М., Чанг Дж. М., Чен Х. С., Шуй Х.А., Ли Си Ю. и др. Эпигаллокатехин-3-галлат предотвращает развитие волчаночного нефрита у мышей за счет усиления антиоксидантного пути Nrf2 и ингибирования активации воспаления NLRP3. Свободные радикалы Биол Мед . (2011) 51: 744–54. DOI: 10.1016 / j.freeradbiomed.2011.05.016

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

12. Кавалло Т., Гранхольм Н.А. Бактериальный липополисахарид превращает мезангиальный нефрит в пролиферативный волчаночный нефрит, не влияя на процессинг патогенных иммунных комплексов у мышей NZB / W. Ам Дж. Патол . (1990) 137: 971–78.

PubMed Аннотация | Google Scholar

13. Бенселер С.М., Баргман Дж. М., Фельдман Б. М., Тиррелл П. Н., Харви Э., Хеберт Д. и др.Острая почечная недостаточность при системной красной волчанке у детей: лечение и исходы. Ревматология. (2009) 48: 176–82. DOI: 10.1093 / ревматология / ken445

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

15. Фланк Р.С., Робертс М.А., Стрипполи Г.Ф., Чадбан С.Дж., Керр П.Г., Аткинс Р.С. Лечение диффузного пролиферативного волчаночного нефрита: метаанализ рандомизированных контролируемых исследований. Am J Kidney Dis . (2004) 43: 197–208. DOI: 10.1053 / j.ajkd.2003.10.012

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

16. Иллей Г.Г., Остин Х.А., Крейн М., Коллинз Л., Горли М.Ф., Ярборо С.Х. и др. Комбинированная терапия пульс-циклофосфамидом и пульс-метилпреднизолоном улучшает отдаленные почечные исходы без увеличения токсичности у пациентов с волчаночным нефритом. Энн Интерн Мед. . (2001) 135: 248–57. DOI: 10.7326 / 0003-4819-135-4-200108210-00009

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

19.Agostini L, Martinon F, Burns K, McDermott MF, Hawkins PN, Tschopp J. NALP3 образует инфламмасому, обрабатывающую IL-1beta, с повышенной активностью при аутовоспалительном заболевании Muckle-Wells. Иммунитет. (2004) 20: 319–25. DOI: 10.1016 / S1074-7613 (04) 00046-9

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

20. Fu R, Guo C, Wang S, Huang Y, Jin O, Hu H, et al. Активация подоцитами инфламмасом NLRP3 способствует развитию протеинурии при волчаночном нефрите. Ревматический артрит . (2017) 69: 1636–46. DOI: 10.1002 / art.40155

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

22. Abais JM, Xia M, Zhang Y, Boini KM, Li PL. Редокс-регуляция инфламмасом NLRP3: АФК как триггер или эффектор? Антиоксидный окислительно-восстановительный сигнал . (2015) 22: 1111–29. DOI: 10.1089 / ars.2014.5994

CrossRef Полный текст | Google Scholar

23. Лю Х., Цао М.М., Ван И, Ли Л.К., Чжу Л.Б., Се Г.Й. и др. Стресс эндоплазматического ретикулума участвует в связи между воспалением и аутофагией при диабете 2 типа. Gen Comp Эндокринол . (2015) 210: 124–9. DOI: 10.1016 / j.ygcen.2014.09.006

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

24. Shin MS, Kang Y, Lee N, Wahl ER, Kim SH, Kang KS, et al. Самостоятельная двухцепочечная (ds) ДНК индуцирует продукцию IL-1β из человеческих моноцитов путем активации инфламмасомы NLRP3 в присутствии антител против dsDNA. Дж. Иммунол . (2013) 190: 1407–15. DOI: 10.4049 / jimmunol.1201195

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

25.Шин М.С., Кан Й., Ли Н., Ким С.Х., Кан К.С., Лазова Р. и др. U1-малый ядерный рибонуклеопротеин активирует инфламмасому NLRP3 в моноцитах человека. Дж. Иммунол . (2012) 188: 4769–75. DOI: 10.4049 / jimmunol.1103355

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

26. Каленберг Дж.М., Такер С.Г., Бертье С.К., Коэн С.Д., Кретцлер М., Каплан М.Дж. Активация инфламмасомы IL-18 приводит к дисфункции эндотелиальных клеток-предшественников при системной красной волчанке. Дж. Иммунол .(2011) 187: 6143–56. DOI: 10.4049 / jimmunol.1101284

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

27. Каленберг Дж. М., Кармона-Ривера С., Смит С. К., Каплан М. Дж. Активация нейтрофильных внеклеточных ловушек белком инфламмасомы NLRP3 усиливается в макрофагах волчанки. Дж. Иммунол . (2013) 190: 1217–26. DOI: 10.4049 / jimmunol.1202388

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

30. Харрис Дж., Хартман М., Рош С., Зенг С.Г., О’Ши А., Шарп Ф.А. и др.Аутофагия контролирует секрецию IL-1beta, направляя про-IL-1beta на деградацию. Дж. Биол. Хим. . (2011) 286: 9587–97. DOI: 10.1074 / jbc.M110.202911

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

31. Сайто Т., Фуджита Н., Джанг М. Х., Уэмацу С., Ян Б. Г., Сато Т. и др. Потеря белка аутофагии Atg16L1 увеличивает индуцированную эндотоксином продукцию IL-1beta. Природа . (2008) 456: 264–8. DOI: 10.1038 / nature07383

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

32.Ко ДжХ, Юн СО, Ли ХД, О Джи. Рапамицин регулирует активацию макрофагов путем ингибирования путей NLRP3 инфламмасома-p38 MAPK-NFkappaB в зависимости от аутофагии и p62. Онкотоваргет . (2017) 8: 40817–31. DOI: 10.18632 / oncotarget.17256

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

33. Чо М. Х., Чо К., Кан Х. Дж., Чон Э. Я., Ким Х. С., Квон Х. Дж. И др. Аутофагия в микроглии разрушает внеклеточные бета-амилоидные фибриллы и регулирует инфламмасому NLRP3. Аутофагия . (2014) 10: 1761–75. DOI: 10.4161 / auto.29647

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

34. Кларк А.Дж., Эллингхаус Ю., Кортини А., Странкс А., Саймон А. К., Ботто М. и др. Аутофагия активируется при системной красной волчанке и необходима для развития плазмобластов. Ann Rheum Dis. (2015) 74: 912–20. DOI: 10.1136 / annrheumdis-2013-204343

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

37.Qi YY, Zhou XJ, Cheng FJ, Hou P, Ren YL, Wang SX и др. Повышенная аутофагия является цитопротектором против повреждения подоцитов, вызванного антителами и интерфероном-альфа при волчаночном нефрите. Энн Рум Дис . (2018) 77: 1799–809. DOI: 10.1136 / annrheumdis-2018-213028

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

38. Ленуар О., Ясик М., Эник С., Гийонне Л., Хартлебен Б., Борк Т. и др. Аутофагия эндотелиальных клеток и подоцитов синергетически защищает от индуцированного диабетом гломерулосклероза. Аутофагия . (2015) 11: 1130–45. DOI: 10.1080 / 15548627.2015.1049799

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

39. Кан Ю.Л., Салим М.А., Чан К.В., Юнг Б.А., Закон Гонконга. Трегалоза, независимый от mTOR индуктор аутофагии, облегчает повреждение подоцитов человека после лечения пуромицином аминонуклеозидом. PLoS ONE . (2014) 9: e113520. DOI: 10.1371 / journal.pone.0113520

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

40.Туччи М., Кватраро С., Ломбарди Л., Пеллегрино С., Даммакко Ф., Сильвестрис Ф. Гломерулярное накопление плазмоцитоидных дендритных клеток при активном волчаночном нефрите: роль интерлейкина-18. Ревматический артрит . (2008) 58: 251–62. DOI: 10.1002 / art.23186

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

42. Moon JS, Mun CH, Kim JH, Cho JY, Park SD, Park TY, et al. Внутриядерная доставка домена модуляции транскрипции Tbet-улучшенного волчаночного нефрита у мышей (NZB / NZW) F1, предрасположенных к волчанке. Kidney Int. (2018) 93: 1118–30. DOI: 10.1016 / j.kint.2017.11.017

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

43. Мескита Д. мл., Кирштайн Г.М., Франко М.Ф., Рейс Л.А., Пераццио С.Ф., Мескита Ф.В. и др. CD4 ⁺ Т-хелперные клетки и регуляторные Т-клетки при активном волчаночном нефрите: дисбаланс в сторону преобладающего ответа Th2? Clin Exp Immunol . (2018) 191: 50–9. DOI: 10.1111 / cei.13050

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

44.Упадхьяя Дж., Ким MJ, Ким Й.Х., Ко SR, Пак Х.В., Ким М.К. Ферментативное образование соединения-K из гинсенозида Rb1 с помощью ферментного препарата из культивированного мицелия Armillaria mellea. J Ginseng Res. (2016) 40: 105–12. DOI: 10.1016 / j.jgr.2015.05.007

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

45. Chen J, Wu h2, Wang Q, Chang Y, Liu K, Wei W. Соединение K метаболита гинсенозида подавляет праймирование Т-клеток посредством модуляции движения дендритных клеток и костимулирующих сигналов, что приводит к облегчению индуцированного коллагеном артрита. J Pharmacol Exp Ther. (2015) 353: 71–9. DOI: 10.1124 / jpet.114.220665

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

46. Акао Т., Канаока М., Кобаши К. Появление соединения K, основного метаболита гинзенозида Rb1 кишечными бактериями, в плазме крови крыс после перорального измерения соединения K с помощью иммуноферментного анализа. Биол Фарм Булл . (1998) 21: 245–9. DOI: 10.1248 / bpb.21.245

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

47.Cuong TT, Yang CS, Yuk JM, Lee HM, Ko SR, Cho BG и др. Соединение K агониста глюкокортикоидных рецепторов регулирует зависимую от Dectin-1 воспалительную передачу сигналов посредством ингибирования активных форм кислорода. Life Sci . (2009) 85: 625–33. DOI: 10.1016 / j.lfs.2009.08.014

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

48. Чу М.К., Сакурай Х., Ким Д.Х., Сайки И. Метаболит сапонина женьшеня подавляет метастазирование, вызванное фактором некроза опухоли альфа, путем подавления передачи сигналов ядерного фактора-каппаВ в клетках рака толстой кишки мышей. Онкол Реп . (2008) 19: 595–600. DOI: 10.3892 / или 19.3.595

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

49. Ли Дж., Чжун В., Ван В., Ху С., Юань Дж., Чжан Б. и др. Соединение метаболита гинсенозида K способствует восстановлению колита, вызванного декстрансульфатом натрия, и подавляет воспалительные реакции, подавляя активацию NF-κB. PLoS ONE . (2014) 9: e87810. DOI: 10.1371 / journal.pone.0087810

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

50.Song, Wei L, Du Y, Wang Y, Jiang S. Защитный эффект соединения K метаболита гинзенозида против диабетической нефропатии путем ингибирования активации воспаления NLRP3 и сигнального пути NF-κB / p38 у мышей с высоким содержанием жиров и индуцированного стрептозотоцином диабета. Инт Иммунофармакол . (2018) 63: 227–38. DOI: 10.1016 / j.intimp.2018.07.027

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

51. Yu F, Haas M, Glassock R, Zhao MH. Новое определение волчаночного нефрита: клинические последствия патофизиологических подтипов. Нат Рев Нефрол . (2017) 13: 483–95. DOI: 10.1038 / nrneph.2017.85

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

52. Цай Ю.Л., Хуа К.Ф., Чен А., Вэй К.В., Чен В.С., Ву С.Й. и др. Инфламмасома NLRP3: патогенетическая роль и потенциальная терапевтическая мишень для нефропатии IgA. Научный сотрудник . (2017) 24: 41123. DOI: 10.1038 / srep41123

CrossRef Полный текст | Google Scholar

53. Ян С.М., Ка С.М., Ву Х.Л., Йе Ю.К., Куо С.Х., Хуа К.Ф. и др. Домен 1 тромбомодулина улучшает диабетическую нефропатию у мышей за счет воспаления, опосредованного воспалением против NF-κB / NLRP3, усиления антиоксидантной активности NRF2 и ингибирования апоптоза. Диабетология . (2014) 57: 424–34. DOI: 10.1007 / s00125-013-3115-6

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

54. Chang YP, Ka SM, Hsu WH, Chen A, Chao LK, Lin CC, et al. Ресвератрол подавляет активацию воспаления NLRP3, сохраняя целостность митохондрий и усиливая аутофагию. J Cell Physiol . (2015) 230: 1567–79. DOI: 10.1002 / jcp.24903

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

55. Chi HH, Hua KF, Lin YC, Chu CL, Hsieh CY, Hsu YJ, et al.Передача сигналов IL-36 способствует активации инфламмасомы NLRP3 и оси IL-23 / IL-17 при воспалении и фиброзе почек. Дж. Ам Соц Нефрол . (2017) 28: 2022–37. DOI: 10.1681 / ASN.2016080840

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

56. Чен В., Ван Дж., Ло И, Ван Т., Ли Х, Ли А. и др. Гинсенозид Rb1 и соединение K улучшают передачу сигналов инсулина и ингибируют связанную со стрессом ER активацию воспаления NLRP3 в жировой ткани. J Женьшень Res .(2016) 40: 351–8. DOI: 10.1016 / j.jgr.2015.11.002

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

59. Sul OJ, Park HJ, Son HJ, Choi H-S. Аутофагия, индуцированная липополисахаридами (ЛПС), ответственна за усиленный остеокластогенез. Клетки Мол . (2017) 40: 880–87. DOI: 10.14348 / molcells.2017.0230

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

60. Сюй Й., Джаганнатх С., Лю X. Д., Шарафхане А., Колодзейска К. Э., Эйсса Н. Т..Toll-подобный рецептор 4 — это датчик аутофагии, связанный с врожденным иммунитетом. Иммунитет . (2007) 27: 135–44. DOI: 10.1016 / j.immuni.2007.05.022

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

61. Рубцов Ю.П., Расмуссен Дж. П., Чи Е. Ю., Фонтенот Дж., Кастелли Л., Йе Х и др. Интерлейкин-10, производный от регуляторных Т-клеток, ограничивает воспаление на границе раздела сред. Иммунитет . (2008) 28: 546–58. DOI: 10.1016 / j.immuni.2008.02.017

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

62.Zhang JL, Sun DJ, Hou CM, Wei YL, Li XY, Yu ZY и др. Лечение mAb к CD3 уменьшало тяжесть вызванного цРТПХ волчаночного нефрита у мышей за счет усиления регуляции Foxp3 + регуляторных Т-клеток в ткани-мишени: почках. Транспл Иммунол . (2010) 24: 17–25. DOI: 10.1016 / j.trim.2010.09.002

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

MacRumors: Apple News and Rumors

Apple в бета-версии iOS 15.2 представила новую опцию безопасности при обмене сообщениями, которая предназначена для обеспечения большей безопасности детей в сети, защищая их от потенциально опасных изображений.Мы видели много недоразумений по поводу этой функции и подумали, что было бы полезно дать краткое описание того, как работает безопасность связи, и прояснить неправильные представления.

Обзор безопасности связи

Безопасность общения предназначена для защиты несовершеннолетних от нежелательных фотографий, содержащих неприемлемый контент.

Как пояснили в Apple, Communication Safety предназначена для обнаружения наготы на фотографиях, отправленных или полученных детьми. IPhone или iPad выполняет сканирование изображений на устройстве в приложении «Сообщения», и при обнаружении наготы фотография становится размытой.

Если ребенок нажимает на размытое изображение, ему говорят, что изображение чувствительное, показывая «части тела, которые обычно закрыты нижним бельем или купальными костюмами». Эта функция объясняет, что фотографии с обнаженным телом могут быть «использованы для причинения вам вреда» и что человек на фотографии может не захотеть ее видеть, если она была опубликована без разрешения.

Apple также предлагает детям способы получить помощь, посоветовавшись с взрослыми, которым доверяют их жизнь. Есть два сквозных экрана, которые объясняют, почему ребенок может не захотеть просматривать обнаженную фотографию, но ребенок все равно может выбрать просмотр фотографии, поэтому Apple не ограничивает доступ к контенту, а предоставляет инструкции.

Безопасность связи полностью включена

Когда выйдет iOS 15.2, коммуникационная безопасность станет дополнительной функцией. Он не будет включен по умолчанию, и тем, кто его использует, необходимо будет включить его специально.

Коммуникационная безопасность — для детей

Communication Safety — это функция родительского контроля, доступная с помощью функции Family Sharing. С помощью функции Family Sharing взрослые в семье могут управлять устройствами детей младше 18 лет.

Родители могут включить безопасность общения с помощью функции «Семейный доступ» после обновления до iOS 15.2. Безопасность общения доступна только на устройствах, предназначенных для детей младше 18 лет, которые входят в группу семейного доступа.

Дети младше 13 лет не могут создать Apple ID, поэтому создание учетной записи для детей младшего возраста должно выполняться родителями с помощью функции «Семейный доступ». Дети старше 13 лет могут создать свой собственный «Apple ID», но их по-прежнему можно пригласить в группу семейного доступа при наличии родительского надзора.

Apple определяет возраст человека, владеющего «Apple ID», по дню рождения, используемому в процессе создания учетной записи.

Невозможно включить безопасность связи на устройствах для взрослых

Поскольку функция семейного доступа предназначена исключительно для учетных записей «Apple ID», принадлежащих лицам младше 18 лет, нет возможности активировать безопасность общения на устройстве, принадлежащем взрослому.

Взрослым не нужно беспокоиться о безопасности передачи сообщений, если только они не родители, управляющие ею для своих детей. В группе семейного доступа, состоящей из взрослых, не будет опции безопасности общения, и сканирование фотографий в сообщениях не выполняется на устройстве взрослого.

сообщений остаются зашифрованными

Безопасность связи не ставит под угрозу сквозное шифрование, доступное в приложении «Сообщения» на устройстве iOS. Сообщения остаются полностью зашифрованными, и содержимое сообщений не отправляется другому лицу или в Apple.

Apple не имеет доступа к приложению «Сообщения» на детских устройствах, и Apple не уведомляется о том, включена ли и когда используется безопасность связи.

Все делается на устройстве и ничего не выходит из iPhone

В целях безопасности общения изображения, отправляемые и получаемые в приложении «Сообщения», сканируются на предмет обнаженности с использованием технологий машинного обучения и искусственного интеллекта Apple.Сканирование полностью выполняется на устройстве, и никакой контент из Сообщений не отправляется на серверы Apple или куда-либо еще.

Используемая здесь технология аналогична технологии, которую приложение «Фото» использует для идентификации домашних животных, людей, еды, растений и других предметов на изображениях. Вся эта идентификация также выполняется на устройстве таким же образом.

Когда Apple впервые описала безопасность общения в августе, была функция, предназначенная для уведомления родителей, если дети предпочитают просматривать обнаженные фотографии после того, как их предупредили об этом.Это было удалено.

Если ребенка предупреждают о фотографии обнаженной натуры и он все равно ее просматривает, родители не будут уведомлены, и полная автономия находится в руках ребенка. Apple удалила эту функцию после критики со стороны правозащитных групп, которые опасались, что это может стать проблемой в ситуациях родительского насилия.

Коммуникационная безопасность — это не мера Apple против CSAM

Apple впервые объявила о безопасности связи в августе 2021 года и была представлена ​​как часть набора функций безопасности детей, которые также включали инициативу против CSAM.

План Apple против CSAM, который Apple описал как способный идентифицировать материалы сексуального насилия над детьми в iCloud, не был реализован и полностью отделен от безопасности общения. Со стороны Apple было ошибкой вводить эти две функции вместе, потому что одна не имеет ничего общего с другой, за исключением того, что обе находятся под зонтиком безопасности детей.

Мера Apple по борьбе с CSAM вызвала много откликов, потому что фотографии, загруженные в iCloud‌, будут сканироваться по базе данных известных материалов о сексуальном насилии над детьми, а пользователи Apple недовольны перспективой сканирования фотографий.Есть опасения, что технология, которую Apple использует для сканирования фотографий и сопоставления их с известным CSAM, может быть расширена в будущем для охвата других типов материалов.

В ответ на широко распространенную критику Apple отложила свои планы по борьбе с CSAM и вносит изменения в то, как это будет реализовано, прежде чем выпустить его. В настоящее время в iOS не было добавлено никаких функций защиты от CSAM.

Дата выпуска и внедрение

Безопасность связи включена в iOS 15.2, которая в настоящее время доступна в виде бета-версии. Бета-версию могут загрузить разработчики или участники программы бета-тестирования Apple. Пока неизвестно, когда iOS 15.2 выйдет для широкой публики.

Apple планирует предоставить новую документацию по безопасности связи, когда выйдет iOS 15.2, с дополнительным объяснением того, как работает эта функция.

.